一、血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究（论文文献综述）
张春英[1]（2020）在《p57KIP2、p53、C-erbB-2在子宫内膜样癌中的表达及与临床病理特征的关系》文中提出目的:通过检测p57KIP2、p53、C-erbB-2三种蛋白在子宫内膜样癌（Endometrioid carcinoma,EC）组织及正常子宫内膜组织中的表达情况,探讨三者与EC发生发展的关系,为临床判断EC患者的生物学行为提供一定的临床参考价值。方法:选取存档的100例EC组织作为实验组,60例正常子宫内膜（增生期、分泌期各30例）为对照组,运用Envision法,分别检测p57KIP2、p53、C-erbB-2三种蛋白在EC组织及正常子宫内膜组织中表达情况,以及三者在EC组织不同临床病理特征（组织学分级、临床分期、肌层浸润深度、年龄大小、有无淋巴结转移）中的相关性分析。结果:1、p57KIP2、p53、C-erbB-2蛋白在EC组织和增生期、分泌期组织中的表达情况:p57KIP2蛋白在EC组织的阳性表达率（30%）低于分泌期组织中的阳性表达率（93.3%）,高于在增生期组织中的阳性表达率（3.3%）,在增生期、分泌期与EC组织中的阳性表达率三组总体比较有统计学意义（P<0.05）,在增生期与分泌期、增生期与EC、分泌期与EC组织中两两比较均有统计学意义（P≤0.017）。p53蛋白在EC组织中的阳性表达率（59%）最高,在分泌期组织中不表达,在增生期组织中阳性表达率（3.3%）;C-erbB-2蛋白在EC组织的阳性表达率（50%）最高,在增生期组织中阳性表达率（6.7%）,在分泌期组织中的阳性表达率（3.3%）最低;p53蛋白和C-erbB-2蛋白在增生期、分泌期与EC组织中的阳性表达率三组总体比较均有统计学意义（P<0.05）,两两比较仅在EC与增生期、EC与分泌期表达之间比较有意义（P≤0.017）。2、p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白在EC组织中的表达及与临床病理特征的关系:在EC组织中,p57KIP2蛋白随着组织学分级的增加,阳性表达率呈递减趋势（在组织学Ⅰ级中表达最高,组织学Ⅲ级中表达最低）,总体比较差异有统计学意义,两两比较仅在Ⅰ级和Ⅲ级、Ⅱ级和Ⅲ级之间的表达比较有统计学意义（P≤0.017）。p53、C-erbB-2蛋白均随着组织学分级的增加,其阳性表达率呈递增趋势（在组织学Ⅰ级中表达最低,在组织学Ⅲ级中表达最高）,总体比较差异有统计学意义（P<0.05）;两两比较,p53和C-erbB-2蛋白均仅在Ⅰ级和Ⅱ级、Ⅰ级和Ⅲ级之间的表达比较有意义（P≤0.017）。随着癌组织由浅肌层往深肌层浸润,p57KIP2蛋白阳性表达率逐渐减少,p53、C-erbB-2蛋白阳性表达率逐渐增加（P<0.05）。随着手术病理分期由早期向晚期进展,p57KIP2蛋白阳性表达率逐渐减少,C-erbB-2蛋白阳性表达率逐渐增加,两者的阳性表达率均有统计学意义（P<0.05）。p53蛋白的阳性表达率与手术病理分期无关。三者阳性表达率均与盆腔淋巴结转移、患者年龄大小无关（P>0.05）。3、p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白表达之间的关系:在EC组织中,p53蛋白、C-erbB-2蛋白表达呈正相关（P<0.05）;p57KIP2、p53蛋白,p57KIP2、C-erbB-2蛋白表达无相关性（P>0.05）。结论:1、在EC组织中,p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白可能与EC的发生发展有关,而p57KIP2蛋白参与的细胞周期调控失衡可能与女性激素周期性调控有关。2、在EC组织中,随着组织学分级、手术病理分期、肌层浸润深度的增加,p57KIP2蛋白的表达逐渐减少,C-erbB-2蛋白的表达则逐渐增加;p53蛋白随着组织学分级、肌层浸润深度的增加,其表达逐渐增加。p57KIP2蛋白的低表达,p53、C-erbB-2蛋白的高表达,可能预示着EC患者有更差的预后。3、在EC组织中,p53蛋白与C-erbB-2蛋白表达之间呈正相关。4、联合检测EC患者肿瘤组织中p57KIP2、p53与C-erbB-2蛋白的表达情况,对指导临床评估患者的生物学行为有较为积极的指导意义。
马丽[2]（2012）在《中国乳腺癌HER2基因检测、临床病理特征分析及流行病学研究》文中认为目前,分子诊断技术在乳腺癌个体化诊疗的临床实践中发挥着越来越重要的作用。依据受体状态选择乳腺癌内分泌治疗和分子靶向治疗成为个体化诊疗的典范,尤其是人表皮生长因子受体2（HER2）在乳腺癌治疗中的地位越来越受重视,不仅可以预测细胞毒性药物蒽环类或紫杉类药物的疗效,而且已经成为评价抗HER2靶向药物临床获益的重要分子标志物。针对HER2的单克隆抗体曲妥珠单抗,使HER2阳性乳腺癌患者复发风险明显降低,无论单药、与化疗联合或辅助治疗均能够持续改善患者的无病生存时间,因其在乳腺癌治疗取得的卓越疗效,成为肿瘤分子靶向治疗的代表。因此,根据HER2表达状态制定细胞毒性药物及靶向药物的合理治疗方案,并预测药物疗效和评价预后已经成为乳腺癌诊疗的主要策略。那么,如何准确检测HER2的状态,为乳腺癌患者的诊断、治疗和评价提供依据,成为目前一项意义重大的紧迫任务。HER2定位于17q12,是表皮生长因子受体家族（EGFR）的成员之一,HER2基因可以编码分子量为185KDa的酪氨酸激酶活性跨膜糖蛋白。HER2与配体结合形成二聚体,构象发生改变,导致细胞内受体酪氨酸激酶的磷酸化,引起信号通路上的连锁反应,促进细胞增殖分化。国内外研究报道,HER2过度表达与乳腺癌的发生、发展、侵袭和转移密切相关。然而,随着国内HER2检测的逐步开展以及曲妥珠单抗的临床应用,在HER2检测准确性及其临床实践中的指导意义方面暴露出一系列问题：一、HER2的检测方法多种多样,但检测技术的标准化、检测结果的准确性、不同方法的一致性以及进口检测试剂价格昂贵等问题亟待解决。二、中国乳腺癌患者HER2表达的流行病学情况是否与国外存在差异仍不明确。三、17号染色体多倍体在中国乳腺癌患者中的表达情况,对HER2状态的影响,以及与临床病理特征的关系仍不清楚。四、临床实践中是否可以用血清代替肿瘤组织标本检测HER2的状态仍存在争议。为此,我们试图从以上几个方面进行研究,研究内容分为四个部分：第一部分：国产GLP和进口PathVysion FISH探针试剂盒检测乳腺癌HER2基因状态的比较研究。通过收集108例乳腺浸润性导管癌肿瘤组织标本,分别采用国产试剂盒GLP和进口试剂盒Vysis PathVysion探针检测乳腺癌患者肿瘤组织HER2基因表达水平,比较2种试剂检测HER2基因状态的差异。结果表明,与Vysis探针相比,国产GLP HER2探针试剂盒在检测乳腺癌HER2基因扩增的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值均高,且具有价格优势,在国内临床评价乳腺癌HER2基因状态中具有广泛应用价值。第二部分：中国乳腺癌HER2表达的流行病学研究。运用免疫组织化学（IHC）和原位杂交技术（FISH）分别评价了不同地域和不同种族3,149例中国乳腺癌患者HER2的表达水平,分析了HER2的表达与地理分布及临床病理特征的相关性。结果表明,中国乳腺癌患者发病年龄较西方早,临床病理特征与美国和欧洲相比,肿瘤负荷较大（p<0.001）、组织分级较差（p<0.001）、且ER/PR多为阴性（p<0.001）。提示,中国乳腺癌患者的肿瘤侵袭性可能更强。HER2蛋白过表达率和基因扩增率分别为23.3%和27.5%,两者一致率达71.2%（Kappa=0.494,p<0.001）。HER2基因扩增与临床分期晚（Ⅲ/Ⅳ）（p=0.002）、肿瘤负荷大（>5cm）（p=0.002）、组织分级差（p<0.001）、绝经（p<0.001）、ER/PR表达阴性（p=0.002）以及淋巴结转移≥4个（p<0.001）密切相关。南方与北方乳腺癌患者的HER2扩增状态无显着差异（p>0.05）。本研究揭示了中国乳腺癌HER2蛋白过表达和基因扩增流行病学特征,以及病理特征与西方人群的差异,为乳腺癌个体化治疗和早期预防提供有价值的理论依据。第三部分：17号染色体多倍体与HER2表达的相关性研究。运用FISH技术检测了348例乳腺癌患者的HER2基因和17号染色体CEP17拷贝数的情况,结合HER2蛋白表达（IHC）情况和相关临床病理特征进行分组对比分析。结果表明,所有患者中CEP17平均拷贝数为2.1（1.0-12.4）,17号染色体多倍体的比率（CEP17≥3）为13.8%（48/384）。HER2基因拷贝数>6的患者占26.4%（92/348）,HER2/CEP17>2.2的占25.3%（88/348）。HER2拷贝数>6的患者中,17号染色体多倍体的比率占38.0%（35/92）,HER2蛋白表达与HER2基因拷贝数以及比值密切相关。17号染色体多倍体与HER2蛋白表达或基因扩增相关,但相关性较差（分别为r=0.271,p<0.05和r=0.223,p<0.05）。在HER2拷贝数≤6的患者中,17号染色多倍体的比率占5.4%（5/92）。单纯17号染色多倍体组的临床病理特征更倾向于HER2阴性组的病理特征。提示,17号染色体信号的增加影响了部分HER2结果的判读,但单纯的17号染色体多倍体并不能作为HER2基因扩增的独立预测因子。第四部分：检测乳腺癌患者血清中HER2ECD的水平。本研究收集了我院Ⅰ-ⅢA期乳腺癌患者术前血232例,运用ELISA法检测血清HER2ECD水平,IHC法和FISH法检测配对肿瘤组织HER2的表达,分析血清HER2ECD表达与临床病理特征关系及临床意义。结果表明,血清HER2ECD的中位浓度为6.8ng/ml,HER2ECD水平升高的界值为7.4ng/ml,低于转移性乳腺癌血清HER2ECD水平的临界值（15ng/ml）。89例（38.3%）患者血清HER2ECD水平升高,而肿瘤组织77例（33.2%）HER2阳性表达,一致率达76.7%。血清HER2ECD升高与绝经（p<0.001）、高级别组织分级（p<0.001）.ER-（p=0.007）.PR-（p<0.001）.CA153水平升高（p=0.039）和TPS水平升高（p=0.018）密切相关。与单纯检测肿瘤组织HER2表达相比,同时联合检测术前血清中HER2ECD水平能提供更多的信息。我们支持降低术前血清中HER2ECD的界值指标更有利于评价乳腺癌患者HER2的状态及预后。本研究通过回答上述问题,明确了HER2国产试剂盒广泛的应用价值、获得了中国乳腺癌HER2表达的流行病学数据、了解了17号染色体多倍体如何影响HER2的表达、阐述了血清代替组织标本检测HER2状态的可行性,为今后临床实践中准确判读HER2状态提供了依据,推动了HER2检测技术的标准化及乳腺癌个体化靶向治疗的临床应用。目的通过与进口Vysis PathVysion HER2探针试剂盒（简称“VysisPathVysion探针试剂”）比较,评价国产金菩嘉GLP HER2探针试剂盒（简称"GLP探针试剂”）检测乳腺癌患者HER2基因状态的临床应用价值。方法收集108例乳腺浸润性导管癌肿瘤组织标本,分别采用GLP和Vysis PathVysion HER2探针试剂运用FISH技术检测乳腺癌患者HER2基因扩增状态。以IHC染色结果为参考,比较2种探针试剂检测乳腺癌患者HER2基因状态的差异,并评价GLP HER2探针试剂检测乳腺癌患者组织标本中HER2基因扩增的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值。比较2种试剂盒不同时间段检测同一标本的重复性和稳定性。结果GLP HER2探针和PathVysion HER2探针检测乳腺癌患者组织标本中HER2基因扩增率分别为25.0%（27/108）和26.9%（29/108）。与PathVysion HER2探针相比,GLP HER2探针检测乳腺癌患者组织标本中HER2基因扩增的敏感度、特异度和准确度分别为89.7%（26/29）、98.7%（78/79）和96.3%（104/108）,阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）均为96.3%（26/27,78/81）。GLP HER2探针检出17号染色体多倍体的敏感度、特异度和准确度分别为93.3%（14/15）、100%（93/93）和99.1%（107/108）。在1个月内,均间隔5天时间,4次分别检测了同一标本的HER2基因状态,Vysis PathVysion HER2试剂盒检测结果表明,4次检测一致率为100%。GLP试剂盒的检测结果同样表明,4次检测的一致率为100%,提示2种试剂盒的稳定性和可重复性较高。结论GLP HER2探针试剂盒在检测乳腺癌患者组织标本中HER2基因扩增的敏感度和特异度高,在临床评价乳腺癌HER2基因状态中具有广泛应用价值。本研究运用免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）和原位杂交技术（Fuorescence in situ hybridization, FISH）分别评价了中国不同地域和不同种族3,149例乳腺癌患者HER2的表达水平,分析了HER2表达的流行病学特征、与地理位置以及及临床病理特征的关系,阐述了中国乳腺癌患者的病理特征与西方国家的差异。结果表明,中国乳腺癌患者发病年龄较西方早,有2个发病高峰,临床病理特征与美国、欧洲相比,肿瘤负荷较大（p<0.001）、组织分级较差（p<0.001）、且ER/PR多为阴性（p<0.001）,提示,中国乳腺癌患者的肿瘤侵袭性可能更强。HER2蛋白过表达率和基因扩增率分别为23.3%和27.5%,两者一致率达71.2%（Kappa=0.494,p<0.001）。其中,IHC检测结果为2+的患者中,FISH检测到72.9%为HER2基因无扩增。随机比对5个参与检测的实验室间的HER2结果显示,IHC和FISH检测结果不一致率分别为5%-28%、1%-16%。HER2基因扩增与肿瘤进展期（p=0.002）、肿瘤直径>5cm（p=0.002）、中度或差的组织分级（p<0.001）、绝经（P<0.001）、ER/PR阴性（p=0.002）以及淋巴结浸润>4枚（p<0.001）密切相关。满族和回族人群HER2扩增率显着高于其他少数民族（p<0.001）。南方与北方乳腺癌患者的HER2扩增状态无显着差异（p>0.05）。本研究揭示了中国乳腺癌HER2蛋白过表达和基因扩增流行病学特征,阐述了中国乳腺癌患者临床病理特征与西方人群的差异,为乳腺癌个体化治疗和早期预防提供有价值的理论依据。目的：本研究探讨了17号染色体多倍体在判读浸润性乳腺癌HER2检测结果中的影响。目前,美国ASCO/CAP指南将FISH检测HER2阳性定义为单个核HER2基因拷贝数>6或HER2/CEP17比值>2.2。但这一准侧存在一定的矛盾,提示17号染色体多倍体可能会影响HER2基因状态的结果判读。方法：收集了自2010年5月至2011年8月中国医学科学院肿瘤医院就诊的乳腺癌患者肿瘤石蜡组织标本348例。运用FISH技术检测肿瘤组织HER2和CEP17的拷贝数变化。IHC检测HER2蛋白表达状态。结果：所有患者中CEP17半均拷贝数为2.1（1.0-12.4）,17号染色体多倍体的比率（CEP17≥3）为13.8%（48/384）。HER2基因拷贝数>6的患者占26.4%（92/348）,HER2/CEP17>2.2的占25.3%（88/348）。HER2拷贝数>6的患者中,17号染色体多倍体的比率占38.0%（35/92）,HER2蛋白表达与HER2基因拷贝数以及比值密切相关。17号染色体多倍体与HER2蛋白表达或基因扩增相关,但相关性较差（分别为r=0.271,p<0.05和r=0.223,p<0.05）。在HER2拷贝数≤6的患者中,17号染色多倍体的比率占5.4%（5/92）。与HER2阳性组的临床病理特征相比,单纯17号染色多倍体组的临床病理特征更倾向于HER2阴性组的病理特征。结论：17号染色体CEP17拷贝数的增加影响了部分HER2结果的判读。17号染色体多倍体与HER2蛋白/基因的表达相关,但相关性差,且17号染色多倍体组的临床病理特征更倾向于HER2.阴性组的病理特征,提示单纯的17号染色体多倍体并不能作为HER2基因扩增的独立预测因子。目的：目前对血清中HER2胞外区的研究多集中在复发转移晚期乳腺癌患者,对早期乳腺癌患者血清中HER2胞外区表达的研究甚少。本研究分析了乳腺癌血清HER2ECD表达与临床病理特征的关系及临床应用价值。方法：收集中国医学科学院肿瘤医院Ⅰ-ⅢA期乳腺癌患者术前血以及配对肿瘤组织标本232例,运用酶联免疫吸附法（ELISA）评价血清HER2ECD水平,IHC法和FISH法检测肿瘤组织HER2表达,分析乳腺癌血清HER2ECD表达水平与临床病理特征的关系。结果：血清HER2ECD（?）的中位浓度为6.8ng/ml（范围1.3-42.1ng/ml）, HER2ECD水平升高的界值为7.4ng/ml,低于转移性乳腺癌HER2ECD水平的临界值15ng/ml。89例（38.3%）患者血清HER2ECD表达水平升高,而肿瘤组织77例（33.2%）HER2阳性表达,一致率达76.7%。血清HER2ECD升高与绝经（p<0.001）、高级别组织分级（p<0.001）、ER-（p=0.007）、PR-（p<0.001）、CA153水平升高（p=0.039）和TPS水平升高（p=0.018）密切相关。结论：与单独通过肿瘤组织检测HER2表达状态相比,联合术前血清中HER2ECD水平能提供更多信息。我们支持降低术前血清中HER2ECD （?）临界值指标更有利于评价早期乳腺癌患者肿瘤组织HER2的状态。
刘媛[3]（2008）在《EGFR和C-erbB-2在涎腺肿瘤中的表达及其意义》文中研究表明目的:肿瘤是涎腺组织中最常见的疾病,而肿瘤的发生是由于细胞周期中生长因子及其受体、细胞因子及众多癌基因、抑癌基因产物等对DNA代谢的调节发生改变。表皮生长因子受体家族及其相关配体是调节正常细胞生长的重要信号系统,此系统的紊乱可导致细胞的恶性转化。本文旨在研究ErbB家族中表皮生长因子受体（EGFR）和C-erbB-2在涎腺肿瘤中的表达,探讨EGFR和C-erbB-2两者之间的关系及临床意义。方法:选取华中科技大学同济医学院附属同济医院涎腺肿瘤标本70例,其中良性肿瘤30例、恶性肿瘤40例。应用免疫组化S-P法检测石蜡包埋标本中的EGFR和C-erbB-2的阳性率。另取2例已知EGFR、C-erbB-2蛋白表达阳性的乳腺浸润性导管癌组织作阳性对照。结果:EGFR阳性表达定位于细胞膜或细胞质中;C-erbB-2阳性表达定位于细胞膜上。在口腔涎腺恶性肿瘤组织中,EGFR蛋白的阳性表达率为67.5%（27/40）,高于口腔涎腺良性肿瘤组织43.3%（13/30）（P<0.05） ;C-erbB-2蛋白的阳性表达率为33.3%（10/30）,显着高于口腔涎腺良性肿瘤组织6.7%（2/30）（P<0.05）。C-erbB-2与EGFR蛋白表达两者呈显着的正相关（r= 0.665,P<0.01）。结论:EGFR和/或C-erbB-2在涎腺肿瘤中均有表达,而且C-erbB-2与EGFR同时过度表达,可为涎腺肿瘤早期诊断、治疗及判断预后提供依据。
文明[4]（2008）在《SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针研制及磁共振基因成像》文中研究表明恶性肿瘤是威胁人类健康的常见病及多发病,对恶性肿瘤的早期、特异性诊断是提高生存率、改善生活质量的关键所在。传统的影像诊断方法主要针对肿瘤形成实质性肿块后成像,但此时患者已经处于临床中晚期阶段,疗效不佳,预后差。寻找一种能早期、特异性诊断肿瘤的新方法,一直是国内外医药工作者追求的目标。兴起于上世纪末的分子影像学（Molecular imaging）,着眼于采用影像的手段非侵入性地对活体内参与生理和病理过程的分子进行定性或定量可视化观察,在早期、特异性诊断恶性肿瘤方面有着极其巨大的应用和开发前景。在分子成像研究中,制备特异性高、亲和力好的靶向探针是实现活体分子成像的关键因素。本课题将分子生物学中的反义基因技术用于影像医学领域,构建分子探针:以c-erbB2癌基因的mRNA片段作为靶点,制备与该序列互补的反义寡脱氧核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,ASODN）,利用超顺磁性氧化铁（superparamagnetic Iron Oxide, SPIO）标记于ASODN,制成反义探针。由于引入体内的探针能按碱基互补原则与癌基因的mRNA互补结合,故能特异地分布在癌基因扩增和过度表达的肿瘤组织中,采用磁共振（magnetic resonance,MR）成像,可望显示出肿瘤的存在和大小。可见,反义基因显像技术可以检测出只有癌基因扩增和过度表达、还没有形成实体的肿瘤组织,因此可以达到早期、特异性诊断肿瘤的目的。实验中选择c-erbB2癌基因作为研究的靶基因,是因为该癌基因是neu基因在人类的同源基因,其扩增和表达只限于恶性肿瘤组织。除此之外,该基因还与肿瘤组织的病理分级、淋巴结转移、临床分期密切相关,并常作为临床化疗方案选择、预后判断的主要指标。因此该基因为靶向诊断提供了良好的位点,它一旦出现扩增和过度表达,都会使细胞mRNA的含量增加,相应提供出结合的靶向位点也同样增加。由于生长旺盛的肿瘤细胞膜上存在着大量的转铁蛋白受体,容易将含SPIO的反义探针导入肿瘤细胞内,提高了细胞顺磁性物质含量;通过MR扫描,便于得到解剖结构清晰、信噪比高、对比度好的图像。MR具有成像时间窗长、空间与时间分辨力高、图像对比度好等优点,是理想的分子影像学检测设备。但是,MR最大的缺点是对信号探测的敏感性较低,一般只能检测到组织中μmol级的顺磁性物质含量。要实现对癌基因表达的MR可视化检测,必须针对肿瘤形成过程中的关键分子标记顺磁性载体。常用的顺磁性载体物质SPIO,具有磁力矩,在磁场中单个磁力矩沿着磁场自由排列,导致质子T2去相位驰豫加速,组织T2加权像信号显着降低,能明显增加组织之间的信号差别;在去掉外加磁场后,其磁性迅速消失,呈现超顺磁性特点。此外,SPIO还具有毒副作用小等优点,广泛应用于示踪活体干细胞（如神经干细胞、胚胎干细胞和间充质干细胞等）等研究领域,是一种较理想、安全的对比剂或分子载体。但是,SPIO直接注入体内后,大多聚集在网状内皮系统如肝、脾及淋巴结内,对其他器官或肿瘤组织的靶向性不强。如何实现组织器官的主动靶向显影,一些研究方向包括采用SPIO标记单克隆抗体、特异性蛋白、质粒DNA等大分子物质,而标记ASODN则未见国内外文献报道。方法:第一部分SPIO的制备与检测目前国外已有部分商业化的SPIO面市,但这些产品不仅在国内市场上难觅踪影,价格昂贵,粒径从几十到几百纳米不等,而且使用的表面活性剂也各不相同,对于开展具有知识产权的创新性研究十分不利。我们采用共沉淀法制备纳米级SPIO,重点对样品的表征、磁学参数、急性毒性作用、稳定性等方面进行检测,为进一步将其作为基因载体奠定基础。1.物理性状:应用X射线粉末衍射法、透射电镜、原子力显微镜测定样品的主要成分、粒径。2.磁学参数:振动样品磁强计及1.5 T超导型MR仪测定样品的饱和磁化强度、剩磁、驰豫率等。3.急性毒性作用:90只小鼠随机分为口服灌胃、静脉注射、腹腔注射组（n=30）,分别按总剂量2104.8 mg/kg、给药容积40 ml/kg口服灌胃;总剂量438.5 mg/kg、给药容积25 ml/kg静脉注射;以及总剂量1578.6 mg/kg,给药容积30 ml/kg腹腔注射;各组另设10只小鼠按相应方式给予等量生理盐水作为对照。给药后饲养14天,观察小鼠的一般情况及主要脏器的病理学改变,检测血清主要生化指标。4.稳定性考察:参照一般注射试剂的基本要求,对样品分别进行强化实验和长期实验,观察或测定样品的性状、pH值、铁浓度、粒径、饱和磁化强度及T2磁豫率等参数。第二部分SPIO标记的c-erbB2癌基因反义探针制备及质量考察1.探针制备:人工合成针对c-erbB2 mRNA 5’端转录起始位的ASODN片段,及相应的正义及无义片段（序列）,采用化学交联法分别将SPIO标记于相应的寡脱氧核苷酸片段上。2.探针物理及磁学参数、生物性状考察:原子力显微镜观察表征,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性;聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性;1.5 T超导型MR仪及振动样品磁强计测定磁学参数。3.急性毒性作用:采用最大给药量法,60只清洁级昆明种小鼠随机分为口服灌胃、静脉注射、腹腔注射组,分别按总剂量为2104.8mg/kg,给药容积40ml/kg口服灌胃;总剂量为438.5mg/kg,给药容积25ml/kg静脉注射;以及总剂量为1578.6mg/kg,给药容积30ml/kg腹腔注射;各组还另设20只小鼠按相应方式给予等量生理盐水作为对照。所有实验小鼠均在25℃室温下连续饲养14天,观察并记录饲养期间小鼠的一般情况、主要脏器的病理学、血常规、凝血指标和血清主要生化指标改变。4.放置后稳定性考察:样品在4±1℃冰箱中放置3月,观察或测定性状、pH值、铁浓度、粒径、饱和磁化强度及T2磁豫率等参数。第三部分SPIO标记的c-erbB2癌基因反义探针兔药代动力学参数测定及小鼠体内分布、排泄1.兔药代动力学:大白兔15只,体重2.0±0.4kg,随机分为小剂量、中剂量及大剂量3组,每组均经左侧耳缘静脉注射反义探针,浓度分别为3mg/kgFe（小剂量）、6mg/kgFe（中剂量）、12mg/kgFe（大剂量）,分别在注射前、注射后1min、3min、5min、10min、20min、40min、60min、120min、180min、360min、720min从右侧耳缘静脉采血0.5ml,原子吸收光谱法测定血液中铁浓度,用3P97软件拟合曲线方程,计算半衰期、药时曲线下面积、清除速率和血浆蛋白结合率。2.小鼠体内分布:BALB/c小鼠尾静脉给予12ml/kgFe剂量的反义探针,于给药后1min、10min、30min、60min、180min、360min这6个时间点作MR扫描,测定心、肝、脾、肾、肌肉的信噪比;MR扫描之后处死动物,取心、肝、脾、肺、肾、肌肉,测定铁含量。3.反义探针的排泄:BALB/c小鼠5只,分别装入代谢笼中饲养,先收集给探针前24h的尿液及粪便,测定铁含量作为本底。之后分别由尾静脉给予3.76ml/kgFe剂量的反义探针,于注射后0～24h、24～48h收集尿液和粪便,测定铁含量。第四部分反义探针体外转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株1.探针转染后对SK-Br3肿瘤细胞株的生物学特性影响:MTT法及台盼蓝排除实验测定对细胞活力的影响;RT-PCR半定量分析对c-erbB2基因mRNA表达的影响;Western blot测定对c-erbB2蛋白表达的影响。2.探针转染细胞的特异性:通过原子吸收光谱法测定细胞中铁含量,光学显微镜及透射电子显微镜观察细胞内铁分布等手段,并设置反义探针转染不表达c-erbB2癌基因的Fuda肿瘤细胞株,以及正义和无义探针转染SK-Br3肿瘤细胞株、SPIO及ASODN转染SK-Br3肿瘤细胞株作对照,来观察反义探针转染SK-Br3肿瘤细胞株的特异性。3.体外MR成像:选择反义探针转染SK-Br3肿瘤细胞株为研究对象,以正义探针和无义探针转染的SK-Br3肿瘤细胞株、反义探针转染Fuda肿瘤细胞株、SPIO及ASODN转染SK-Br3肿瘤细胞株、蒸馏水作为对照。以上7组分别置入Ependoff管,3英寸表面线圈固定,MR行横断位扫描,扫描参数:GRE序列,TR/TE 225/5.3ms,翻转角30°,视野16.0mm,层厚1.8cm,矩阵256×128。第五部分SPIO标记的c-erbB2癌基因反义探针用于活体磁共振基因成像1.构建荷瘤裸鼠模型:选取5～6周龄及体重12g～18g的裸鼠,于右后肢内侧腋窝皮下接种对数生长期的SK-Br3细胞株,15天后即可成功建模。另外,采用同样的方法构建5只Fuda细胞株裸鼠荷瘤模型作为对照。2.确定反义探针剂量及MR扫描时间:根据预实验及反义探针在大白兔体内分布的药-时曲线图,反义探针在荷瘤裸鼠的MR活体成像剂量为12ml/kgFe,并确定MR扫描的时间点分别在注射反义探针后的10min、30min、60min、180min、360min。3.MR扫描序列与参数包括:①T1WI SE序列TR/TE 400/13 ms,激发次数6;②T2 WI FSE序列TR/TE 2500/40ms,激发次数2;③T2* WI SE序列TR/TE 2000/80ms,激发次数2;④T2* FSPGR序列TR/TE 130/9ms,激发次数2,翻转角6°。分别行横断位及冠状位扫描,层厚4mm,层距1mm,矩阵256×222,视野10cm。4.MR图像分析:观察全部荷瘤裸鼠的肝、脾、心、肾、肌肉及肿瘤组织信号强度变化并测定信噪比（取值范围至少包含50个像素）,绘制时间-信号曲线。5.病理学检测:在完成每个时间点的扫描后,处死动物并取出肝、脾、心、肾、肌肉及肿瘤组织,HE及普鲁士蓝染色,光镜下观察。结果:第一部分SPIO的制备与鉴定1.采用共沉淀一步法成功制备外包葡聚糖的SPIO,所得样品成分为四氧化三铁晶体。透射电镜显示葡聚糖包被的SPIO核心部分即铁粒子外形主要为球形,分布比较均匀,粒径不超过5 nm,不能显示葡聚糖包被后的整个粒径;而高精度原子力显微镜显示葡聚糖包被的SPIO呈立方体形,颗粒均匀,核心铁粒子直径在5 nm内,葡聚糖包被后的实际粒径在20～35 nm之间。2.样品的T 2弛豫率为0.155×106mo l-1·sec-1,饱和磁化强度为694.2162emu/g Fe,比饱和磁化强度683.9568emu/g,比剩余磁化强度为30.4648emu/g,剩磁为21.46374Gs,磁化曲线显示样品具有超顺磁性,并与文献记载的国外产品磁学性能十分相近。3.观察期间各组小鼠均未见死亡;各组小鼠血清生化指标无显着差异;H-E染色及Wright骨髓染色显示各组小鼠肝、脾、肾、心、肺和骨髓细胞均无水肿、变性、坏死等改变;普鲁士蓝染色发现给药组小鼠肝、脾内分布少许铁蓝色颗粒,而对照组未见。4.在强化实验和长期实验条件下,样品的性状、pH值、铁浓度、粒径、饱和磁化强度及T2磁豫率等参数,与实验前所检测的数据无统计学差异。第二部分SPIO标记的c-erbB2癌基因反义探针制备及质量考察1.原子力显微镜能观察到c-erbB2癌基因反义探针的化学结构,其颗粒整齐、均匀,排列规则,相互之间可以分开,表面形貌高低起伏,呈立方体形,粒径在25～40 nm之间。2.高效液相凝胶色谱法检测探针联接率为99%,仍保持原有生物活性;聚丙烯酰胺凝胶电泳法显示探针的稳定性良好。3.1.探针的T2弛豫率为0.156×106mo l-1·sec-1,磁化强度为69.4238emu/g Fe,比饱和磁化强度68.4134emu/g,比剩余磁化强度为30.3541emu/g,剩磁为19.7345Gs。3.在观察期间,各组小鼠均未出现死亡,仅个别出现食欲下降、饮水量增多、腹泻、嗜睡、活动增加等,均在3日内恢复正常。脏器系数无统计学差别,肝、脾、肾、心、肺、骨髓等主要脏器颜色、形态未见明显异常改变,H.E染色切片肝、脾、肾、心、肺等细胞和Wright染色的骨髓细胞均无水肿、变性、坏死等改变,仅肝、脾内分布少许蓝色铁颗粒。各组血常规、凝血指标及生化指标无统计学差异。4.在4±1℃放置3月,样品的性状、pH值、铁浓度、粒径、饱和磁化强度及T2磁豫率等参数,与实验前所检测的数据无统计学差异。第三部分SPIO标记的c-erbB2癌基因反义探针兔药代动力学参数测定及小鼠体内分布、排泄1.分别以反义探针小剂量、中剂量、大剂量浓度给药后,药物动力学分布均符合二室模型。2.小剂量给药后半衰期138.96min,药时曲线下面积7029.03ug·ml-1·min-1,清除速率0.000427mg·kg-1·min-1,血浆蛋白结合率23.6%。3.中剂量给药后半衰期142.05min,药时曲线下面积13502.21ug·ml-1·min-1,清除速率0.000444mg·kg-1·min-1,血浆蛋白结合率24.1%。4.大剂量给药后半衰期210.66min,药时曲线下面积28311.73ug·ml-1·min-1,清除速率0.000444mg·kg-1·min-1,血浆蛋白结合率24.3%。5.原子吸收光谱法显示反义探针静脉注射后主要分布在肝、脾组织中,180min达到高峰,之后缓慢下降;MR扫描后通过测定前述脏器的信噪比,得出同样的结论。6.反义探针在小鼠体内经过肠道排出量高于肾脏排出量。第四部分反义探针体外转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株1.MTT法及台盼蓝排除实验显示反义探针转染后对SK-Br3肿瘤细胞株的增殖活力无明显影响。2.通过RT-PCR法检测c-erbB2基因mRNA及Western blot法检测细胞c-erbB2蛋白表达,发现反义探针对SK-Br3细胞的mRNA与蛋白表达均存在抑制作用。3.对转染细胞的形态学（光学及电子显微镜）观察,显示SK-Br3细胞内存在较多铁颗粒,而对照组几乎没有。4. SK-Br3细胞内铁含量与与对照组比较,差异有显着性（F=198.79,P=0.00073）,并明显高于各对照组。5.MR扫描显示转染后的SK-Br3细胞信号明显降低;与对照组比较,信噪比的差异有显着性（P<0.01）。第五部分SPIO标记的c-erbB2癌基因反义探针用于活体磁共振基因成像1.成功构建荷瘤裸鼠模型,两种荷瘤模型在外观上无差别。2.T1WI SE序列对注射反义探针后各时间点的信号强度变化不敏感,信噪比没有统计学上的差别;而其余三个扫描序列（T2WI FSE序列、T2* WI SE序列及T2* FSPGR序列）对注射反义探针后各时间点的信号强度均显示不同程度降低,信噪比有差异。3. SK-Br3细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织在注射反义探针后10min扫描显示信噪比值下降,但肉眼无法确定,30min肉眼可见信号轻度降低,60min信号降低明显,180min降至最低,之后逐渐升高;Fuda细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织注射反义探针后10min扫描显示信噪比值有下降,但肉眼无法确定,之后信噪比值下降不明显,无统计学上差异。4.病理学检查显示SK-Br3肿瘤组织内散在大量斑点状蓝色铁颗粒,而Fuda肿瘤组织内没有。结论:本研究中首先制备用于寡核苷酸载体的SPIO,它具有粒径小,分散度好,磁学参数理想等特点,对小鼠无明显急性毒性,稳定性好,具备作为MR成像对比剂的特点。之后采用化学交联法,连接SPIO与ASODN制成反义探针,该探针具有联接率高、粒径小等特点,超顺磁性,无明显急性毒性,4℃±1℃条件下放置3月后保持原有的稳定性。半衰期长,血浆蛋白结合率适中,使用该探针转染SK-Br3肿瘤细胞株,对细胞活力变化无明显影响,具有较强的特异性,能有效进入细胞内,并明显降低MR扫描下的信号强度。使用该探针用于活体荷瘤裸鼠MR成像,在不同扫描序列及不同时间点观察,发现该反义探针具有较好的靶向性,最佳的扫描时间在注射探针后的60min～180min。本研究SPIO标记的c-erbB2癌基因反义寡脱氧核苷酸探针研制并用于磁共振基因成像,在探索肿瘤的早期、特异性诊断方面,迈出了可喜的一步。
张竹强[5]（2007）在《1.散发性卵巢癌中BRCA1基因突变的研究 2.差别PCR技术检测卵巢癌c-erbB-2癌基因扩增的研究》文中研究表明目的检测BRCA1基因第2个外显子和第20外显子在散发性卵巢癌中的突变情况,探讨其与卵巢癌发病的关系。方法采用PCR-SSCP（聚合酶链反应-单链构象多态性分析）结合银染的方法,对36例无血缘关系的卵巢癌患者BRCA1基因第2,20外显子进行突变检测。结果在外显子2和20的序列中未发现有突变。结论在Ashkenazi犹太妇女中发现的两个突变热点185delAG和5382insC可能不是中国散发性卵巢癌患者的突变热点,说明外显子2和20上的序列对中国人群散发性卵巢癌发生的影响不大,有待于在中国散发性卵巢癌患者中寻找BRCA1基因的新的突变热点。目的探讨卵巢癌c–erbB-2癌基因扩增的临床意义。方法应用差别PCR技术检测36例原发性卵巢癌c–erbB-2癌基因的扩增情况。结果（1）卵巢癌组织中c–erbB-2癌基因的扩增率为58.3%（21/36）;（2）肿块≥5cm的卵巢癌组织及中晚期卵巢癌患者c–erbB-2癌基因扩增率分别为67.9%,73.9%,明显高于肿块﹤5cm的卵巢癌组织25.0%的扩增率和早期卵巢癌患者30.8%的扩增率,均有显着差异;（3）卵巢癌组织中c–erbB-2癌基因扩增与患者年龄、病理类型、淋巴转移、ER及PR无相关性。结论c-erbB-2癌基因扩增与卵巢癌的发生有一定关系,c–erbB-2癌基因扩增对卵巢癌的治疗、预后判断具有重要的临床应用意义。
梁道源[6]（2007）在《M2-PK、C-erbB-2在胃癌中的表达及临床意义研究》文中指出目的：研究肿瘤型丙酮酸激酶（TU M2-PK）、C-erbB-2在健康人,不典型增生,胃癌患者之间表达的差异,从而探讨M2-PK、C-erbB-2对于胃癌早期诊断的价值,寻找胃癌等恶性肿瘤早发现、早治疗的新途径。进一步研究M2-PK、C-erbB-2在胃癌中表达与各病理参数的关系,探讨M2-PK、C-erbB-2对胃癌病情发展、治疗监测和预后判断的指导意义。方法：应用免疫组化法检测标本中M2-PK、C-erbB-2的表达,胃癌组102例,不典型增生组80例,正常对照组44例,统计阳性率,比较其差异。胃癌组再按年龄、性别、临床分期、有无转移、病理分型等参数进行分组,计算阳性率,并进行比较。应用特殊黏液组织化学染色法,进行lauren分型,检测C-erbB-2在不同lauren分型的胃癌患者中表达的差异。应用spss12.0统计软件进行处理,p<0.05认为有统计学意义。结果：M2-PK、C-erbB-2在正常对照组,不典型增生组,胃癌组之间表达的阳性率有显着性差异（p<0.01）。不典型增生组中,M2-PK在轻度、中度、重度之间表达阳性率差异有显着性（p<0.05）,重度不典型增生组高于轻度和中度；C-erbB-2在轻度、中度、重度不典型增生组中的阳性表达率无明显差异。M2-PK与胃癌患者的年龄、性别、发病部位、临床分期、有无转移无关；C-erbB-2与胃癌患者的临床分期、有无转移、lauren分型、细胞分化程度有关（p<0.05）与年龄、性别、病理类型无关,对于C-erbB-2,胃癌进展期高于早期,有转移组高于无转移组,lauren分型肠型高于弥漫型。M2-PK与C-erbB-2对胃癌无明显相关性。结论：M2-PK、C-erbB-2对于胃癌的诊断都有肯定的价值。M2-PK对于胃肠道肿瘤,其灵敏度高于传统的肿瘤标志物,是很有前途的肿瘤标志物。M2-PK对与胃癌的早期诊断及癌前状态的判断更有意义,可考虑应用于普查,以帮助恶性肿瘤的早发现、早治疗。C-erbB-2对胃癌的病情发展及预后判断更有价值,可考虑应用于病情的跟踪随访。
杨兴海[7]（2007）在《脊柱转移癌预后相关因子筛选及Cox模型构建》文中提出目的:探讨相关基因表达及临床指标与脊柱转移癌预后的关系,建立脊柱转移癌预后的Cox模型。方法:选取不明原发灶脊柱转移癌、肺癌脊柱转移、肝癌脊柱转移64例128个样本,构建脊柱转移癌组织芯片;采用免疫组织化学SP法检测肿瘤增殖调控相关基因Bcl-2、C-erbB-2、Cyclin D1、p16、p27kip1、PTEN、p53以及转移相关基因MMP-2、MMP-7、MMP-13、MMP-14、CD44v6、VEGF、nm23H1、OPN在脊柱转移癌组织芯片的表达;多因素分析筛选预后相关基因和临床指标,建立脊柱转移癌预后评估的Cox模型。结果:成功构建脊柱转移癌组织芯片,各基因在脊柱转移癌组织中都出现了不同程度的异常表达;PTEN、p27kip1、MMP-14、CD44v6、OPN表达与生存期有关,其余基因表达与生存期无关;脊柱转移癌预后评估的Cox模型包括内脏转移、病理分级、椎体转移以及CD44v6、OPN、PTEN表达情况。结论:多基因参与了脊柱转移癌的发生、发展过程,内脏转移情况、椎体转移数、病理分级和PTEN、CD44v6、OPN表达水平是影响脊柱转移癌预后的主要因素。预后指数可用于预后判断,高预后指数预示危险度增大,生存期缩短。
朱宇[8]（2006）在《卵巢癌C-erbB2基因表达及T7-ShRNAs对SKOV3细胞的RNAi作用》文中进行了进一步梳理C-erbB2又称neu基因,是1985年确认的v-erbB2相关的原癌基因,与表皮生长因子受体因子（EGFR）十分近似,其过度表达与人类肿瘤的发生有关。利用我科是重点学科,卵巢恶性肿瘤患者多的优势,紧密结合临床查阅了大量卵巢癌患者病历,做了C-erbB2表达的免疫组化研究,研究证实在不同组织分化来源中的卵巢癌中存在C-erbB2基因不同程度的高表达,提示C-erbB2家族在恶性肿瘤的发生与发展过程中起重要的作用,通过随访发现还和预后不良也密切相关。同时还培养了人SKOV3卵巢癌细胞株细胞,根据检索到的基因序列确定了3处靶位点,应用RNAi技术对所培养的细胞进行尝试性的干涉实验;结果表明。转染SKOV3细胞后,其中一条发夹链高效特异地干涉了SKOV3细胞中C-erbB2的表达;RT-PCR、Western blot及细胞生长曲线的结果也与之相符,CCK-8观察卡铂与RNA干涉联合应用取得了明显的抑制效果。从免疫组化、细胞生物到分子生物学,为研究卵巢上皮性癌发病机制和进行基因治疗奠定了基础。
李兵[9]（2004）在《bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染治疗鼻咽癌的实验研究》文中研究表明目的：观察bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸联合转染对人鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞株HNE-1细胞增殖的影响。方法：人工合成并经全硫代磷酸化修饰的bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，ASODN）与脂质体（lipofectin,Lip）混合制备成复合物处理人鼻咽癌细胞株HNE-1,并把实验分为七组：（Ⅰ）正常对照组、（Ⅱ）c-erbB-2正义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅲ）bcl-2正义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅳ）c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅴ）bcl-2反义寡核苷酸+脂质体组、（Ⅵ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（全剂量）联合组和（Ⅶ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组。利用流式细胞仪检测各实验组的细胞周期以及bcl-2与c-erbB-2蛋白表达；利用电子显微镜镜观察各实验组细胞形态学改变；利用MTT试验与克隆（集落）形成试验观察各实验组细胞增殖情况。 结果：实验组与对照组比较，S期（DNA合成期）有逐渐延长的趋势，其中bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组最为明显。从细胞形态学观察：反义治疗组观察到线粒体肿胀、凋亡等现象，而bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组最为典型。MTT试验与克隆（集落）形成试验观察到反义治疗组与其它组细胞增殖抑制率有显着差异（p﹤0.05）,而bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组（增殖抑制率达到了90.12%）与其它组细胞增殖抑制率有极显着差异（p﹤0.01）。流式细胞仪检测各实验组的bcl-2与c-erbB-2蛋白表达发现反义治疗组较其它组明显下调，而bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）联合组bcl-2与c-erbB-2蛋白表达与其它组有极显着差异（p﹤0.01）。结论：bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸转染对人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞增殖有抑制作用，并能下调bcl-2与c-erbB-2蛋白表达，而联<WP=9>合转染的增殖抑制作用更为明显。关键词：鼻咽癌， 基因， 反义寡核苷酸， 联合转染第二部分目的：观察bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸联合转染对顺铂（cisplatin,DDP）诱导的鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞株HNE-1细胞凋亡的影响。 方法：人工合成并经全硫代磷酸化修饰的bcl-2与c-erbB-2基因反义寡核苷酸 （antisense oligodeoxynucleotide，ASODN）与脂质体（lipofectin, Lip）混合制备成复合物处理人鼻咽癌细胞株HNE-1,并把实验分为八组：（Ⅰ）空白对照组、（Ⅱ）脂质体+DDP、（Ⅲ）c-erbB-2正义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅳ）bcl-2正义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅴ）c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅵ）bcl-2反义寡核苷酸+脂质体组+DDP、（Ⅶ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（全剂量）联合+DDP组和（Ⅷ）bcl-2反义寡核苷酸与c-erbB-2反义寡核苷酸+脂质体（半剂量）+DDP联合组。利用流式细胞仪检测各实验组bcl-2与c-erbB-2蛋白表达；利用电子显微镜镜观察各实验组细胞形态学改变；利用末端脱氧核苷转移酶（Tdt）介导的脱氧尿苷三磷酸（dUTP）末端标记法（TUNEL）原位观察细胞凋亡，并计算平均凋亡指数（AI）。 结果：流式细胞仪检测各实验组的bcl-2与c-erbB-2蛋白表达发现反义治疗组较其它组明显下调。电子显微镜观察发现反义治疗组出现以下改变：胞浆内脂滴较多，出现髓样结构，线粒体肿胀崩解，溶酶体大量出现；细胞核内染色质边集、可见脂滴、空泡化改变；细胞核的固缩变形，凋亡小体和凋亡细胞清晰典型。TUNEL检测发现：第2、3、4组凋亡指数（AI）无明显差异（p>0.05）, 第58组较14组AI有极显着差异（P<0.01）,其中第8组凋亡指数明显高于其余各组（P<0.01）。结论：bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染能促进顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡，表明鼻咽癌的综合治疗、基因治疗并不排斥其它治疗手段。
王传新,邹雄,王谦[10]（2002）在《血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究》文中提出目的:探讨c-erbB2蛋白在诊断恶性肿瘤中的价值。方法:应用c-erbB2试剂盒,根据双抗夹心法原理,定量测定血清c-erbB2蛋白。结果:11种恶性肿瘤患者血清c-erbB2蛋白总阳性率为36.26%（207/571）,敏感性依次为肝癌72.22%（26/36）,胰腺癌47.83%（11/23）,喉癌47.73%（21/44）,结直肠癌39.34%（24/61）,乳腺癌38..95%（37/95）,卵巢癌32.65%（16/49）,胶质瘤30.91%（17/55）,肺癌31.11%（14/45）,淋巴瘤28.13%（9/32）,胃癌25.29%（22/87）,食管癌22.73%（10/44）。结论:定量检测c-erbB2蛋白,对消化道肿瘤有较高诊断价值,对不同种类恶性肿瘤均有较高敏感性,可作为一种新的肿瘤标志物应用于临床诊断。
二、血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究（论文提纲范文）
（1）p57KIP2、p53、C-erbB-2在子宫内膜样癌中的表达及与临床病理特征的关系（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）中国乳腺癌HER2基因检测、临床病理特征分析及流行病学研究（论文提纲范文）
| 表索引 图索引 缩略词索引 中文摘要 Abstract 引言 参考文献 第一部分 |
| GLP和PathVysion |
| FISH探针试剂盒检测乳腺癌HER2基因状态的比较研究 前言 材料与方法 结果 讨论 小结 参考文献 第二部分 |
| 中国乳腺癌HER2表达的流行病学研究及临床病理特征分析 前言 材料与方法 结果 讨论 小结 参考文献 第三部分 |
| 17号染色体多倍体对乳腺癌HER2基因状态的影响 前言 材料与方法 结果 讨论 小结 参考文献 第四部分 |
| 乳腺癌血清中HER2 |
| ECD的表达研究 前言 材料与方法 结果 讨论 小结 参考文献 基金资助 文献综述 参考文献 个人简历 在读期间发表文章 致谢 |
（3）EGFR和C-erbB-2在涎腺肿瘤中的表达及其意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 英文摘要 前言 材料和方法 结果 附图1 讨论 附图2 小结 参考文献 综述 HER |
| 家族与肿瘤--分子机制与靶向治疗 参考文献 硕士在读期间所发表的文章 良性成牙骨质细胞瘤：病例报告及文献复习 附图 参考文献 英文缩略词表 致谢 |
（4）SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针研制及磁共振基因成像（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 SPIO 的制备与检测 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 SPIO 标记的C-ER882 癌基因反义探针制备及质量考察 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 SPIO 标记的C-ER882 癌基因反义探针兔药代动力学参数测定及小鼠体内分布、排泄 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 反义探针体外转染高表达C-ER882 癌基因的SK-BR3 肿瘤细胞株 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第五部分 SPIO标记的c-erbB2 癌基因反义探针用于活体磁共振基因成像 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述1 |
| 文献综述2 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表文章目录 |
| 攻读博士学位期间学术交流和课题申报情况 |
（5）1.散发性卵巢癌中BRCA1基因突变的研究 2.差别PCR技术检测卵巢癌c-erbB-2癌基因扩增的研究（论文提纲范文）
| 论文一 散发性卵巢癌中BRCA1 基因突变的研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 论文二 差别PCR 技术检测卵巢癌c-erbB-2 癌基因扩增的研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 卵巢癌相关基因的研究进展 |
| 1 卵巢癌相关的主要癌基因 |
| 2 卵巢癌相关的抑癌基因 |
| 3 与卵巢癌转移密切相关的基因 |
| 4 卵巢癌细胞凋亡相关基因 |
| 5 卵巢癌相关的肽类生长因子 |
| 6 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）M2-PK、C-erbB-2在胃癌中的表达及临床意义研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表论文目录 |
（7）脊柱转移癌预后相关因子筛选及Cox模型构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 详细摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 脊柱转移癌组织芯片的建构 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 增殖调控相关基因在脊柱转移癌的表达及意义 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 转移相关因子在脊柱转移癌的表达及意义 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第四部分 脊柱转移癌预后的多因素分析及 Cox 模型构建 |
| 引言 |
| 资料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 组织微阵列技术原理及在肿瘤研究中的应用价值 |
| 在校期间主要学术活动 |
| 致谢 |
（8）卵巢癌C-erbB2基因表达及T7-ShRNAs对SKOV3细胞的RNAi作用（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 第一部分 前言 |
| 第一章 关于C-ER882 基因 |
| 第二章 C-ER882 基因过度表达与卵巢癌研究现状 |
| 第三章 RNAI 现状及研究进展 |
| 第二部分 C-ER882 基因(过度)表达与卵巢免疫组化研究 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 结果与分析 |
| 一、卵巢组织中C-e1682 基因过度表达的免疫组化研究 |
| 二、C-e1682 基因表达与卵巢恶性肿瘤患者预后的关系 |
| 讨论 |
| 第三部分 T7-shRNAs 对SKOV3 卵巢癌细胞株细胞中C-erbB2表达的干涉作用 |
| 一、体外转录法合成siRNA |
| 二、细胞转染 |
| 三、半定量的RT-PCR |
| 四、蛋白质免疫印记杂交(Western -Blot) |
| 五、CCK-8 细胞生长抑制情况测定 |
| 结果与分析 |
| 一、体外转录实验结果 |
| 二、SK-OV3 细胞转染shRNA 后结果 |
| 三、半定量的RT-PCR 结果 |
| 四、Western Blot 结果 |
| 五、细胞生长抑制 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 课题创新性总结 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 致谢 |
（9）bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染治疗鼻咽癌的实验研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染对鼻咽癌HNE-1细胞增殖的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染对顺铂诱导鼻咽癌HNE细胞调亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染对鼻咽癌HNE-1细胞增殖抑制的分子机理 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸对人鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 图片 |
| 全文总结 |
| 课题创新性 |
| 文献综述一 细胞凋亡在头颈肿瘤研究的进展 |
| 文献综述二 bcl-2在鼻咽癌基因治疗的研究进展 |
| 致 谢 |
| 从事科研活动情况 |
（10）血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1临床资料 |
| 1.2方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 c-erbB2的测定结果 |
| 2.2 11种恶性肿瘤患者c-erbB2蛋白敏感性排序 |
| 2.3 鳞癌、腺癌、转移癌和非转移癌c-erbB2阳性率比较 |
| 3 讨论 |
四、血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究（论文参考文献）
- [1]p57KIP2、p53、C-erbB-2在子宫内膜样癌中的表达及与临床病理特征的关系[D]. 张春英. 遵义医科大学, 2020(12)
- [2]中国乳腺癌HER2基因检测、临床病理特征分析及流行病学研究[D]. 马丽. 北京协和医学院, 2012(11)
- [3]EGFR和C-erbB-2在涎腺肿瘤中的表达及其意义[D]. 刘媛. 华中科技大学, 2008(05)
- [4]SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针研制及磁共振基因成像[D]. 文明. 重庆医科大学, 2008(12)
- [5]1.散发性卵巢癌中BRCA1基因突变的研究 2.差别PCR技术检测卵巢癌c-erbB-2癌基因扩增的研究[D]. 张竹强. 内蒙古科技大学包头医学院, 2007(07)
- [6]M2-PK、C-erbB-2在胃癌中的表达及临床意义研究[D]. 梁道源. 泰山医学院, 2007(03)
- [7]脊柱转移癌预后相关因子筛选及Cox模型构建[D]. 杨兴海. 第二军医大学, 2007(02)
- [8]卵巢癌C-erbB2基因表达及T7-ShRNAs对SKOV3细胞的RNAi作用[D]. 朱宇. 吉林大学, 2006(10)
- [9]bcl-2与c-erbB-2反义寡核苷酸联合转染治疗鼻咽癌的实验研究[D]. 李兵. 重庆医科大学, 2004(03)
- [10]血清癌基因C-erbB2蛋白对恶性肿瘤诊断价值的研究[J]. 王传新,邹雄,王谦. 山东大学学报(医学版), 2002(06)