一、“更年春”对实验性原发性骨质疏松病理形态学的初步作用（论文文献综述）
连雅君[1]（2021）在《狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究》文中进行了进一步梳理目的为开发抗骨质疏松症新型药物奠定基础,探索狗骨胶、双膝骨胶宝在治疗骨质疏松症疾病上的作用及相关信号通路,拓宽中医药在动物药材应用上的研究思路和研究方向。研究方法①理论探究:梳理历代中医着作、中医家对骨质疏松症的病机、病因及治疗等方面的文字记载,对中医药治疗骨质疏松症的中医认知及治疗思路做出归纳总结;通过“以形补形、五行生克”及“温肾助阳,活血通经”理论分别探究狗骨胶及双膝骨胶宝二者治疗骨质疏松症中医理论基础,为后续研究提供充分的理论依据。②实验研究:通过超高效的液相色谱质谱联用非靶点代谢组学分析方法对狗骨胶、炒制的狗骨粉进行成分分析及鉴定,比较不同的炮制方法下二者在成分上的差异,对比总结狗骨胶炮制方式的优点及在促吸收和抗骨质疏松症治疗方面的优势;通过比较戊酸雌二醇、狗骨胶、双膝骨胶宝治疗维甲酸骨质疏松症模型雌性大鼠的基础体重,肛温,耳廓局部温度,内脏指数,骨密度,骨矿量,HE染色,MASSON染色的差异进行组间观察,分析狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症药效研究;通过生化分析仪检测血清磷、钙、碱性磷酸酶,尿磷、钙,ELISA法检测血清OC、PN1P、CTX-1,分析狗骨胶、双膝骨胶宝对骨代谢的影响;通过ELISA法检测血清OPG,用WB、PCR法检测RANK、RA NKL、OPG、TRAF6、NF-κB指标在蛋白、mRNA的表达,免疫组化法观察RANKL、OPG的阳性表达,探究狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症在经典机制RANKL/OPG/TR AF6的效果,分析其在经典通路RANK/RANKL/OPG及TRAF6/NF-κB信号通路上的治疗作用,研究狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症内在机制。研究结果①理论研究结果:骨质疏松症疾病是一种符合中医概念骨痿的疾病,病位于肾,牵连肝脾,以阴阳失调为根,古代文献中记载的病机多与肾脏亏损,筋骨萎弱有关,可将肾精亏虚,瘀血阻滞,筋骨萎弱总结为本病的根本病机;骨痿的病因则与外邪风寒湿邪所感、情志失调、先天后天失调等有关。治疗的方法有温补肾阳法、滋补肾阴法、阴阳双补法、脾肾并治滋肾阴化湿痰法,肝肾并治补益肝肾法等。“以骨补骨,五行生克”理论为狗骨胶治疗骨质疏松症疾病的理论基础,双膝骨胶宝的理论基础基于仲景肾气丸加减变化而成,该方应用温肾健脾,活血通经法治疗肾阳虚血瘀类骨质疏松症。②实验研究结果正离子模式下,通过匹配分析筛选差异性成分212种,负离子模式下,筛选并匹配分析出差异性成分125种。正离子模式下,狗骨胶相对表达量偏高的成分有阿普比妥、胆碱、甜菜碱、脯氨酸、L-苯丙氨酸、荆芥内酰胺、新海藻糖、苦参碱、羟脯氨酸等,其中氨基酸6种;负离子模式下,狗骨胶相对表达量偏高的成分有:琥珀酸盐、脯氨酸、腺嘌呤、黄嘌呤、柠檬酸、异丁酮、L-正亮氨酸、肉豆蔻酸、白氨酸、肾上腺酸、次黄嘌呤、硬皮酸、色氨酸等,其中氨基酸4种。经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠的BMD、BMC含量明显下降（P<0.001）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝药物治疗后的BMD、BMC含量明显上升（P<0.01,P<0.001）;HE染色结果表明,骨质疏松症模型大鼠的骨小梁间隙增大（P<0.01）,经双膝骨胶宝药物治疗后骨小梁的数量有所增加（P<0.01）,骨小梁间隙距离呈现明显减少（P<0.05）。骨质疏松症模型大鼠的血清ALP含量显着地升高（P<0.001）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后ALP含量均出现了明显下降（P<0.01,P<0.001）;骨质疏松症模型大鼠血清钙含量降低（P<0.05）,经双膝骨胶宝药物治疗后血清钙含量升高（P<0.05）;骨质疏松症模型大鼠的血清磷含量明显升高（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶的药物治疗后血清磷含量明显降低（P<0.05）;经双膝骨胶宝药物治疗后的骨质疏松症模型大鼠的尿钙含量明显有所下降（P<0.01）,模型大鼠的尿磷含量明显有所上升（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后尿磷含量明显有所下降（P<0.05,P<0.01）;骨质疏松症模型大鼠血清的PN1P含量有所下降（P<0.001）,经过戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后的PN1P含量有所上升（P<0.05）;骨质疏松症模型大鼠的CTX-1含量有所上升（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后CTX-1含量明显有所下降（P<0.05,P<0.01）;骨质疏松症模型大鼠的骨钙素含量明显下降（P<0.01）,经戊酸雌二醇片、双膝骨胶宝的药物治疗后骨钙素含量显着升高（P<0.05,P<0.01）。骨质疏松症模型大鼠的血清OPG含量明显降低（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后血清OPG含量均有明显上升（P<0.01,P<0.001）;经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠的胫骨RANKL、TRAF6、NF-κB1蛋白质含量明显上升（P<0.01,P<0.05）,OPG蛋白质含量明显下降（P<0.001）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨RANKL蛋白质浓度含量有明显减少（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨TRAF6蛋白质的含量明显减少（P<0.001）,大鼠胫骨OPG蛋白质总含量明显升高（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨NF-κB1蛋白含量明显降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）;经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠RANK、RANKL、TRAF6的基因相对表达量含量明显升高（P<0.01）,OPG的基因相对表达量含量明显降低（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANK的基因相对表达量含量显着降低（P<0.01,P<0.05）;经戊酸雌二醇片、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANKL的基因相对表达量明显降低（P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后OPG的基因相对表达量明显升高（P<0.01,P<0.05）;经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后TRAF6的基因相对表达量明显降低（P<0.05）。免疫组化结果显示骨质疏松症模型大鼠股骨颈中OPG阳性表达量明显降低（P<0.05）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠OPG阳性表达量明显增高（P<0.01,P<0.05）;经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠股骨颈中RANKL阳性表达量明显增高（P<0.001）,经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANKL阳性表达量明显降低（P<0.001）。结论狗骨胶中相对含量较高的海藻糖、苦参碱、柠檬酸、氨基酸等成分与骨质疏松症相关联,相对含量较高的氨基酸以羟脯氨酸、脯氨酸为主,与骨质疏松症治疗关系密切;狗骨胶中含有的胶束化成分琥珀酸盐、硬脂酸具有增溶效果可促吸收,B族维生素有利于维持维生素的稳定性促进营养物质的吸收。狗骨胶、双膝骨胶宝均可通过调节骨密度水平、骨新陈代谢水平等方式抵抗骨质的流失,可调节RANKL/RANK/OPG信号通路,降低TRAF6含量抑制NF-κB1的炎症反应,通过调控RANKL/OPG/TRAF6信号通路达到抗骨质疏松症疗效。
国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室[2]（2013）在《我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）》文中指出
张小君[3]（2013）在《壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松症的疗效及作用机理研究》文中研究指明目的验证壮骨止痛方Ⅱ抗实验性骨质疏松症的疗效及初步探讨其作用机理。方法取60只SPF级SD雌性大鼠,3月龄,体重250±20g,随机分为假手术组、模型组、壮骨止痛方组、壮骨止痛方Ⅱ高、中、低剂量组六组,每组10只。给药13周后处死,取血、骨标本从骨密度、骨生物力学指标、雌激素（E2）、平均骨小梁密度及病理形态学方面进行研究。结果与模型组比较,壮骨止痛方Ⅱ组1、能明显增加雌鼠腰椎骨密度（P<0.05）。2、能增加雌鼠右胫骨的最大抗弯强度,差异有统计学意义（P<0.05）。3、能增加血清中E2浓度,并且差异有统计学意义（p<0.05）；4、能增加雌鼠左胫骨平均骨小梁密度且差异显着（P<0.05）。结论壮骨止痛方Ⅱ1、能发挥雌激素样物质作用,增加大鼠血清E2水平；2、增加骨最大抗弯强度降低骨折风险。3、能增加模型组大鼠的骨密度及平均骨小梁密度,从而增加骨量,修复骨微细结构,促进骨形成。
邱学敏[4]（2013）在《成骨细胞形成及其异常调控导致绝经后骨质疏松症的分子机制》文中研究表明绝经后骨质疏松症（Postmenopausal osteoporosis, PMO）是以绝经后骨量减少、骨微结构受损,导致骨脆性增加为特征的骨代谢性疾病。成骨细胞（osteoblast, OB）骨形成与破骨细胞（osteoclast, OC）骨吸收间的动态平衡构成了骨重建过程。在相应诱导因素作用下,间充质干细胞可分别向成骨细胞或脂肪细胞分化。自然绝经或去势手术后女性由于性激素缺乏导致骨丢失增加,绝经后骨质疏松症发生率高于同龄男性。PMO主要与性激素紊乱及免疫功能失调密切关联。迄今为止,治疗PMO的方法主要是预防骨吸收；绝经后女性普遍应用的雌激素替代疗法也主要作用于骨吸收,但对成骨细胞分化及其生物学功能调控的研究报道甚少。脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone, DHEA）是体内最丰富的肾上腺来源的甾体激素前体,其生物学功能并不能完全归结于其代谢产物。近来研究发现,绝经后女性DHEA水平低于正常人群,并主张应用DHEA防治PMO。但DHEA对骨代谢作用的生化和分子机制尚未阐明。本研究拟通过如下体内外实验,以解析间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制,免疫细胞对间充质干细胞向成骨细胞分化的调节作用,以及DHEA及补肾宁心中药复方促进间充质干细胞向成骨细胞分化的机制,以评价DHEA或补肾宁心方在防治PMO中的作用机制。第一部分间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制目的探讨小鼠骨髓来源的间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制方法体外分离培养并鉴定小鼠骨髓来源的间充质干细胞,应用成骨诱导培养液处理；PCR检测成骨细胞特征性的转录因子Runx2, Osterix,Osteocalcein及特征性分子collagen1表达；ALP染色鉴定成骨细胞,及细胞碱性磷酸酶活性比色法定量检测ALP活性；Alizarin Red染色检测骨矿化结节的形成。分析研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）, PI3K抑制剂（LY294002）及mTOR途径阻断剂（Rapamycin）对间充质干细胞向成骨细胞分化的调节作用。体外分离培养小鼠间充质干细胞,以成脂诱导条件处理后,PCR检测脂肪细胞特征性转录因子PPARγ表达,Oil Red O染色计数脂肪细胞,并分别给予IGF-1, PI3K抑制剂及mTOR途径阻断剂,观察其对间充质干细胞向脂肪细胞分化的调节作用。结果在成骨诱导条件下,成骨细胞特征性的转录因子Runx2, Osterix, Osteocalcein及特征性分子collagen1表达增加；间充质干细胞向成骨细胞分化；随着培养时间的延长,形成骨矿化结节。IGF-1促进成骨细胞生成；P13K抑制剂及mTOR途径阻断可阻断IGF-1的作用。在成脂诱导液作用下,脂肪细胞特征性转录因子PPARγ表达增加,可形成成熟的脂肪细胞。IGF-1不影响脂肪细胞生成,P13K抑制剂及阻断mTOR途径可增加脂肪细胞的生成。结论在成骨环境下间充质干细胞可优势表达成骨细胞特征性的转录因子Runx2, Osterix, Osteocalcein及特征性分子collagen1;从而分化为成骨细胞,IGF-1可通过PI3K-mTOR途径促进成骨细胞的分化。第二部分免疫细胞对间充质干细胞向成骨细胞分化的调节作用目的研究骨髓单核细胞及调节性T细胞对间充质干细胞向成骨细胞分化的调控作用。方法体外分离培养小鼠骨髓来源的间充质干细胞,体外分离培养小鼠骨髓单核细胞,将骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养,给予成骨细胞诱导条件处理,PCR检测成骨细胞特征性的转录因子Runx2, Osterix, Osteocalcein表达及特征性分子collagen1, RANKL, OPG表达；ALP染色鉴定成骨细胞并定量检测ALP活性；Alizarin Red染色检测骨矿化结节的形成。将骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养后,给予成脂细胞诱导条件处理,PCR检测脂肪细胞特征性转录因子PPARγ表达,Oil Red O染色计数脂肪细胞。体外分离培养小鼠脾脏Treg,将Treg与间充质干细胞共培养,给予成骨细胞诱导条件处理,定量检测ALP活性；Alizarin Red染色检测骨矿化结节的形成。分别以中和抗体阻断Treg特征性细胞因子IL-10,TGFβ, CTLA-4或Transwell阻断细胞间直接接触,以解析Treg调节OB生成的分子基础。将Treg与间充质干细胞共培养,给予成脂细胞诱导液处理,PCR检测脂肪细胞特征性转录因子PPAR γ表达,Oil Red O染色计数脂肪细胞,观察Treg对间充质干细胞向脂肪细胞分化的调节作用。结果在成骨诱导环境下,骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养抑制成骨细胞生成,结果显示骨髓单核细胞增加间充质干细胞RANKL/OPG表达；下调Osterix、Collagen1mRNA表达；不影响Runx2与osteocalcin表达；成骨细胞ALP活性下降；骨矿结节形成的数目显着减少。在成脂诱导环境下,骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养不影响PPARγmRNA表达；对脂肪细胞的生成无显着影响。Treg可促进间充质干细胞向OB分化,形成的成骨细胞ALP活性增强,骨矿结节数目增加。IL-10, TGFβ, CTLA-4中和抗体或Transwell阻断细胞间直接接触,均部分抑制Treg对OB生成的促进效应。Treg不影响间充质干细胞向脂肪细胞的分化。结论骨髓单核细胞可下调间充质干细胞Osterix、Collagen1mRNA表达,从而抑制间充质干细胞向成骨细胞分化,并使生成的成骨细胞ALP活性下降；骨矿结节形成数目显着减少。Treg可经细胞间直接接触或通过其可溶性细胞因子IL-10,TGFβ,及CTLA-4促进间充质干细胞向OB分化,形成的成骨细胞ALP活性增强,骨矿结节数目增加。但骨髓单核细胞及Treg均不影响间充质干细胞表达PPARγmRNA;对脂肪细胞的生成无调控作用。第三部分DHEA促进间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制目的观察DHEA对间充质干细胞向成骨细胞分化的调控机制。方法在成骨培养条件下,分别将DHEA加入间充质干细胞单培养,骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系,Treg与间充质干细胞共培养体系,骨髓单核细胞-问充质干细胞-Treg三者共培养体系中,PCR检测成骨细胞特征性的转录因子Runx2, Osterix, Osteocalcein表达及特征性分子collagen1, RANKL表达；定量检测ALP活性；Alizarin Red染色检测骨矿化结节的形成。并分别给予IGF-1, PI3K抑制剂及mTOR途径的阻断剂观察其对DHEA效应的影响。在成脂培养条件下,分别将DHEA加入间充质干细胞,骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系中,PCR检测脂肪细胞特征性转录因子PPARγ表达,Oil Red O染色计数脂肪细胞。小鼠去势后灌服DHEA, microCT及骨组织化学染色法检测DHEA对去势小鼠骨形态的调控。流式细胞数检测DHEA对鼠脾脏各淋巴细胞亚群（CD19+B细胞、CD14+单核细胞、CD8+T细胞、CD3e-panNK+细胞、FoxP3+Treg细胞）的调控。结果DHEA促进间充质干细胞向成骨细胞分化；在骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系中,DHEA可下调骨髓单核细胞对成骨细胞生成的抑制作用；在Treg与间充质干细胞共培养体系中,DHEA增强Treg对间充质干细胞向成骨细胞分化的促进作用；在骨髓单核细胞-间充质干细胞-Treg共培养体系中,DHEA也促进了间充质干细胞向成骨细胞的分化；DHEA可促进Runx2、 Collagen1、Osteocalci、OSX表达增强,下调RANKL表达；并使生成的成骨细胞ALP活性增加；骨矿结节形成的数目显着增多。IGF-1、PI3K抑制剂及mTOR途径的阻断不影响DHEA效应。在成脂环境中,不管是在间充质干细胞单培养,还是骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系中,DHEA都促进了间充质干细胞向脂肪细胞分化；PPARy mRNA表达增加。在同样间充质干细胞数目条件下,DHEA分别在成骨环境中或成脂环境中,促进生成的成骨细胞数目和脂肪细胞数目的比值是增加的,因此DHEA的成骨作用占主导地位。体内实验结果表明,DHEA显着改善了骨形态。DHEA下调了去势小鼠脾脏CD19+B细胞、CD14+单核细胞、CD8+T细胞比率；DHEA不改变CD3e-panNK+细胞百分比；DHEA促进了FoxP3+Treg百分比。结论DHEA可直接促进间充质干细胞向成骨细胞分化；DHEA还可下调骨髓单核细胞对成骨细胞生成的抑制作用；DHEA增强Treg对间充质干细胞向成骨细胞分化的促进作用；使Runx2、Collagen1、Osteocalci、OSX表达增强,下调RANKL表达；成骨细胞ALP活性增加；骨矿结节数目显着增多。IGF-1并不能加强DHEA的效应,DHEA的作用途径是非PI3K-mTOR依赖。虽然DHEA也可促进间充质干细胞向脂肪细胞分化,但DHEA的成骨作用占主导地位。DHEA显着改善骨形态；并促进FoxP3+Treg百分比。DHEA可显着改善骨免疫内环境。因此,DHEA可能是一种较为理想的PMO防治方案。第四部分BSNXD促进间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制目的观察BSNXD对间充质干细胞向成骨细胞分化的调控机制。方法在成骨培养条件下,分别将BSNXD中药血清和对照鼠血清加入间充质干细胞单独培养,骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系,Treg与间充质干细胞共培养体系,骨髓单核细胞-间充质干细胞-Treg三者共培养体系中,PCR检测成骨细胞特征性的转录因子Runx2, Osterix, Osteocalcein表达及特征性分子collagen1, RANKL表达；定量检测ALP活性；Alizarin Red染色检测骨矿化结节的形成。并分别给予IGF-1, PI3K抑制剂及mTOR途径阻断剂,观察其对BSNXD中药血清效应的影响。在成脂培养环境下,分别将BSNXD中药血清加入间充质干细胞,骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系中,PCR检测脂肪细胞特征性转录因子PPARγ表达,Oil Red O染色计数脂肪细胞。小鼠去势后灌服BSNXD,microCT及骨组织化学染色法检测BSNXD对去势小鼠骨形态的调控。流式细胞数检测BSNXD对鼠脾脏各淋巴细胞亚群（CD19+B细胞、CD14+单核细胞、CD8+T细胞、CD3e-panNK+细胞、FoxP3+Treg细胞）的调控。结果BSNXD促进间充质干细胞向成骨细胞分化；在骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系中,BSNXD可下调骨髓单核细胞对成骨细胞生成的抑制作用；在Treg与间充质干细胞共培养体系中,BSNXD增强Treg对间充质干细胞向成骨细胞分化的促进作用；在骨髓单核细胞-间充质干细胞-Treg共培养体系中,BSNXD也促进了间充质干细胞向成骨细胞的分化；BSNXD可促进Runx2、Collagen1、Osteocalcin、OSX表达增强,下调RANKL表达；并使生成的成骨细胞ALP活性增加；骨矿结节形成的数目显着增多。IGF-1通过PI3K及mTOR信号途径调控BSNXD效应。在成脂环境中,不管是在间充质干细胞单培养,还是骨髓单核细胞与间充质干细胞共培养体系中,BSNXD都不影响间充质干细胞向脂肪细胞分化；PPARy mRNA表达明显无差异。体内实验结果表明,BSNXD显着改善了骨形态。BSNXD下调了去势小鼠脾脏CD19+B细胞、CD14+单核细胞、CD8+T细胞比率; BSNXD促进了CTLA-4+Treg百分比。与DHEA相比,BSNXD增加骨骼BMD更显着。结论BSNXD可直接促进间充质干细胞向成骨细胞分化；BSNXD还可下调骨髓单核细胞对成骨细胞生成的抑制作用；BSNXD增强Treg对间充质干细胞向成骨细胞分化的促进作用；使Runx2、Collagen1、Osteocalcin、OSX表达增强,下调RANKL表达；成骨细胞ALP活性增加；骨矿结节数目显着增多。IGF-1加强BSNXD的效应,BSNXD的作用途径是PI3K-mTOR依赖。BSNXD显着改善骨形态；并增加CTLA-4+Treg百分比。BSNXD可显着改善骨免疫内环境。与DHEA相比,体内外实验证实BSNXD具有更好的成骨作用。因此,BSNXD可能是一种更为理想的PMO防治方案。
杨晓莉,王文君,李大金,金慰芳,周文江[5]（2008）在《更年春方对破骨细胞的分化与凋亡及骨吸收活性的影响》文中指出目的探讨更年春方对破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响。方法分离培养大鼠破骨细胞,加入含不同浓度的"更年春"药物血清培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝面积;采用Annexin V-FITC凋亡荧光染色结合TRAP染色法计数破骨细胞的凋亡率。结果与生理盐水组相比,尼尔雌醇组和更年春高剂量组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显着减少（P<0.01）;破骨细胞的凋亡率明显增加（P<0.01）;尼尔雌醇组,更年春高、中剂量组骨吸收陷窝的面积明显减少（P<0.01）。与尼尔雌醇组相比,更年春高剂量组差别无显着性。结论更年春可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗骨质疏松的作用。
杨晓莉[6]（2008）在《中药更年春对破骨细胞的作用及对骨代谢相关基因表达的影响》文中研究说明绝经后骨质疏松（PMOP）是影响老年妇女健康的一种常见病和多发病,是骨质疏松（OP）的一种常见类型。妇女绝经后,随着雌激素水平的下降,导致骨质疏松的发生,OP表现为骨小梁结构破坏、骨的脆性增高、骨力学强度下降、骨折危险性增加。所以加强对PMOP的防治研究意义重大。雌激素替代治疗（ERT）是预防和治疗绝经后骨质疏松最有效的方法之一。但是,ERT使子宫内膜癌、乳腺癌、心脏疾患和中风等的发病率上升,使其应用受到了限制。而大量临床和实验研究证明,中医中药对主要由雌激素下降引起的围绝经期综合征有较好的治疗效果,而且基本无副作用,因此用中医中药治疗与雌激素下降有关的OP面临着前所未有的走向世界的新契机。“更年春”（GNC）是我院根据中医“肾主骨”理论自行研制的中药制剂,主要成分为补肾中药。临床治疗更年期综合症,效果良好。实验发现:GNC对去卵巢大鼠（OVX）椎骨和股骨的骨密度与生物力学参数有显着的改善作用,并且没有刺激子宫组织增生肥大的副作用。研究还发现,GNC在体外对成骨细胞（OB）的增殖、分化和矿化有明显促进作用。但对破骨细胞（OC）的作用尚有待研究。本实验拟通过体外分离、培养OC,研究中药GNC药物血清对新生大鼠OC形成分化、骨吸收功能及凋亡的影响,以及用Real-time PCR方法检测给予GNC后OVX大鼠骨髓微环境中相关基因的表达变化,以进一步探讨GNC抗骨质疏松作用的分子机制。一、更年春方对破骨细胞的分化、骨吸收活性及凋亡的影响目的探讨更年春方对破骨细胞的分化、骨吸收活性及凋亡的影响。方法分离培养大鼠OC,加入含不同浓度“更年春”的药物血清培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色结合光镜观察对TRAP阳性多核破骨细胞计数;用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝面积;采用Annexin V-FITC凋亡荧光染色结合TRAP染色法计数OC的凋亡率结果与生理盐水组相比,尼尔雌醇组和GNC高剂量组TRAP染色阳性的OC数量显着减少（P＜0.01）;破骨细胞的凋亡率明显增加（P＜0.01）;尼尔雌醇组,更年春高、中剂量组骨吸收陷窝的面积明显减少（P＜0.01）。GNC高剂量组与尼尔雌醇组相比差别无显着性。结论GNC可能通过抑制OC的形成和分化、抑制OC的骨吸收活性,促进OC发生凋亡,发挥其抗骨质疏松的作用。二、更年春方对骨髓微环境中骨代谢相关基因表达的影响目的观察更年春方对OVX大鼠骨髓微环境中骨保护素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）mRNA表达的影响,探讨更年春抗绝经后骨质疏松的可能分子机制。方法取健康10月龄雌性SD大鼠42只,随机平均分为假手术组（S）,生理盐水组（N）、尼尔雌醇组（E）、更年春高剂量组（H）、更年春中剂量组（M）和更年春低剂量组（L）。假手术组仅切除卵巢周围少许脂肪,其余5组均切除卵巢。灌药3天后取腰椎冲洗骨髓提取RNA,实时定量PCR法（Real-timequantitative PCR）检测上述因子mRNA的表达情况。结果尼尔雌醇和高剂量GNC可上调OVX大鼠骨髓微环境中OPG的mRNA的表达（P＜0.05）,进而使RANKL/OPG值下降（P＜0.01）;使M-CSF的mRNA的表答下降（P＜0.05）。GNC中、低剂量组无显着作用,GNC高剂量组和尼尔雌醇组相比,差异无显着性。结论更年春方抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达和RANKL/OPG值有关。
袁怡清[7]（2008）在《更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用观察及部分机理探讨》文中研究指明绝经后妇女体内雌激素水平下降,全身各系统进入老化过程,皮肤组织也随之发生干燥、萎缩、皱纹增加、弹性下降等一系列衰老表现。随着人口的老龄化以及经济水平的增长,提高绝经后妇女的生活质量已不局限于减少骨质疏松症状的发生,延缓皮肤老化的期望也成为绝经后妇女对生活质量的要求而逐渐受到关注。雌激素替代治疗（estrogen replacement therapy,ERT）已被证实能延缓皮肤衰老,而且由于其适应症的局限性及潜在风险性,目前运用雌激素延缓皮肤衰老还不可能被推广到临床。大量临床和实验验证,中医中药对围绝经期综合症有良好的治疗效果,而且基本无副作用。我院临床验证更年春方（Gengnianchun formula,GNC）对围绝经期综合征疗效良好,实验还发现:GNC对雌激素下降导致的去卵巢大鼠骨质疏松及早老性痴呆有预防作用。考虑到中药作用的整体观性,我们拟进一步观察GNC是否对去卵巢大鼠皮肤组织具有抗衰老作用并且探讨其作用机制。1.更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用观察目的观察更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用。方法10-12月龄SD雌性大鼠60只随机分成5组:假手术组（S组）、生理盐水组（N组）、GNC高剂量组（H组）、GNC低剂量组（L组）、尼尔雌醇组（E组）。除S组做假性手术外,其余各组均行双侧卵巢切除术。术后2周开始给予灌药（S组、N组生理盐水,H组、L组GNC,E组尼尔雌醇）。3个月后取大鼠背部皮肤组织做组织学观察,做皮肤组织羟脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的测定,实时定量PCR（RealTime-PCR）定量分析皮肤组织表皮生长因子受体（EGFR）、基质金属蛋白酶Ⅰ（MMP-1）、基质金属蛋白酶Ⅲ（MMP-3）mRNA的表达。结果GNC及尼尔雌醇均能提高去卵巢大鼠皮肤组织HYP含量及SOD含量,降低MDA含量。GNC及尼尔雌醇能提高去卵巢大鼠皮肤组织EGFRmRNA的表达,但皮肤组织MMF-1、MMP-3mRNA表达并无明显改变。结论GNC能增加去卵巢大鼠皮肤组织胶原纤维的表达,此作用与GNC影响胶原蛋白合成途径有关,同时不能排除GNC对胶原蛋白降解途径的影响。GNC能增强去卵巢大鼠皮肤组织的抗氧化损伤能力。2.更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用机理研究目的初步探讨更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织抗衰老作用的机理。方法取第一部分中各组大鼠血清测定雌二醇（E2）的水平,RealTime-PCR定量分析皮肤组织雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）mRNA的表达。免疫组织化学法观察大鼠皮肤组织ERα、ERβ的表达。结果GNC不提高去卵巢大鼠血清E2的水平。ERα、ERβ在大鼠皮肤组织中均有表达。GNC能提高皮肤组织ERα、ERβmRNA的表达。结论GNC延缓皮肤衰老的机制不是通过升高E2水平,可能通与上调皮肤组织ERmRNA的表达有关。
刘克菊,王文君,金慰芳,周文江,李大金[8]（2005）在《更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体亚型的调节》文中研究表明目的探讨更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体（estrogenreceptor,ER）亚型的调节。方法1012月龄SD雌性大鼠卵巢切除建立骨质疏松模型。分别用更年春方、尼尔雌醇灌药4个月,RT-PCR法检测胫骨骨骺与子宫组织ER亚型mRNA的表达。结果大鼠卵巢切除后,血E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均明显下降。尼尔雌醇治疗后椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均增高;更年春方组椎骨骨密度及胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达增高,而子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERαmRNA的表达无明显改变。结论更年春方对卵巢切除骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良反应。其机制可能与其选择性上调胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达有关。
刘克菊,王文君,李大金,周文江[9]（2005）在《更年春方预防实验性原发性骨质疏松作用机理初探》文中认为为探讨更年春方（GNC）预防实验性原发性骨质疏松的作用机理,采用1012月龄SD雌性大鼠去卵巢建立骨质疏松模型,用GNC灌药4个月,RT PCR法检测胫骨骨骺ERα、ERβ、OPG、RANKL、osf2 /cbfal与TRAPmRNA的表达。结果:大鼠去卵巢后,血清E2 水平及胫骨骨骺ERα、ERβ、OPG及osf2 /cbfalmRNA的表达均明显下降,RANKL与TRAPmRNA的表达明显增高。GNC治疗后,血清E2 水平无明显变化,胫骨骨骺ERβ、OPG及osf2 /cbfalmRNA的表达均明显增高,RANKL与TRAPmRNA的表达明显下降。提示GNC可能通过上调胫骨骨骺ERβmRNA的表达,有促进成骨细胞、抑制破骨细胞的作用,从而对实验性原发性骨质疏松有预防功效。
郑雨[10]（2005）在《加味左归饮治疗更年期综合征临床疗效与机理研究》文中研究说明研究背景 更年期是指妇女性成熟期逐渐进入老年期的过渡时期,包括绝经前期、绝经期、绝经后期。妇女从41岁进入更年期到60岁进入老年期,此期长达20年,占女性生命周期的近1/4。更年期妇女约1/3能通过神经内分泌的自我调节达到新的平衡而无自觉症状,2/3妇女则出现一系列性激素减少所致的症状,称为更年期综合征（Climacteric Syndrome）。 更年期综合征是妇科常见病、多发病,目前认为是由更年期卵巢功能的衰退,雌激素变化而使神经内分泌功能失调所引起,其早期主要见血管舒缩症状如烘热、出汗等,情绪改变如烦躁、忧郁、焦虑等,且性活动能力开始减退;到晚期则可见明显的骨质疏松症、记忆力衰退、认知力减弱、心脑血管病、老年痴呆和帕金森病,以及全身内分泌、代谢、免疫、呼吸、泌尿、消化、皮肤、五官等系统疾病的增多。该综合征对妇女的身心健康、工作和生活危害极大。随着社会老龄化,妇女寿命的延长,此病的发病率有上升的趋势,因此日益受到人们的关注和重视。 现代医学对更年期综合征的治疗主要为雌激素替代疗法,或辅以孕激素、雄激素联合用药。虽疗效肯定,但其阴道出血、乳房胀痛等不良反应及中远期可能致子宫内膜癌、乳腺癌等副作用无法排除,不容易被广大妇女接受,其应用有一定局限性。 中医药治疗更年期综合征在临床已开展多年,其能显着改善临床症状及无明显的毒副作用,具有调节内分泌系统、神经系统、免疫系统、自由基代谢等多方面作用。近年来,通过应用现代科学技术手段来研究和揭示中药治疗妇女更年期综合征的机制取得了很多成果,从神经、内分泌、免疫等多方面揭示了中药对更年期综合征患者的调节作用。 加味左归饮临床用于治疗更年期综合征取得了良好的效果。本研究拟通过科学的临床科研设计方法,进一步评价其临床疗效,并通过动物实验探讨其治疗该疾病的作用机理,为该复方的进一步研究和开发奠定坚实的基础。 研究目的
二、“更年春”对实验性原发性骨质疏松病理形态学的初步作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、“更年春”对实验性原发性骨质疏松病理形态学的初步作用（论文提纲范文）
（1）狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一: 动物药狗骨在中医领域的历史沿革与应用 |
| 1. 从狗的历史文化到药用价值 |
| 2. 狗骨的药用历史沿革进展 |
| 3. 讨论 |
| 4. 参考文献 |
| 综述二: 狗骨胶及其相关复方治疗骨质疏松症现代研究及进展 |
| 1. 狗骨(胶)成分、药理基础研究 |
| 2. 狗骨不同剂型的现代研究及应用 |
| 3. 狗骨胶不同剂型的现代研究及应用 |
| 4. 讨论 |
| 5. 参考文献 |
| 综述三: 含胶类复方治疗骨科类疾病常用药物的配伍规律研究 |
| 1. 资料来源及方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 参考文献 |
| 综述四: 骨质疏松症发病机理及RANKL/OPG/TRAF6相关机制研究进展 |
| 1. 骨质疏松症疾病的患病率 |
| 2. 骨质疏松症发病与骨代谢关联性 |
| 3. 骨质疏松症RANK/RANKL/OPG通路研究进展 |
| 4. 骨质疏松症与RANKL/OPG/TRAF6信号通路的相关研究进展 |
| 5. 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分: 理论研究 |
| 理论研究一: 中医古籍文献对骨质疏松症的理论认知 |
| 1. 骨痿的病机:虚实夹杂,骨枯髓减 |
| 2. 骨痿的病因:年老体衰,诸多病因 |
| 3. 骨痿的治疗:补益肾气,滋补阴阳 |
| 4. 小结 |
| 理论研究二: 基于“以形补形、五行生克”理论探究狗骨胶治疗骨质疏松症的理论基础 |
| 1. 对“以形补形”理论应“不拘于泥,师于古,异中求同” |
| 2. 从“五行生克”探虎骨、狗骨抗骨质疏松症之理 |
| 3. 骨胶常见用于治疗骨痿 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 理论研究三: 双膝骨胶宝基于“温肾助阳,活血通经”法治疗骨质疏松症的理论探讨 |
| 1. 双膝骨胶宝组成药物抗骨质疏松症理论探究 |
| 2. 双膝骨胶宝整体方剂配伍特点 |
| 3. 小结 |
| 第二部分: 实验研究 |
| 实验一: 基于UHPLC-QE-MS技术的非靶标代谢组学探究狗骨胶、狗骨粉成分差异分析 |
| 1. 试剂及仪器 |
| 2. 实验流程 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验二: 狗骨胶、双膝骨胶宝治疗维甲酸骨质疏松大鼠抗骨质疏松症疗效观察 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验三: 狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症之骨代谢影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验四: 狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 结语与展望 |
| 一、中医理论研究结果显示 |
| 二、实验研究结果显示 |
| 三、创新性 |
| 四、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松症的疗效及作用机理研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验药物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 实验造模 |
| 2.3 实验给药 |
| 2.4 检测指标 |
| 2.5 数据的统计学处理 |
| 结果与分析 |
| 1 壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松模型大鼠雌激素的影响 |
| 2 壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松模型大鼠右胫骨生物力学指标的影响 |
| 3 壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松症模型大鼠骨密度的影响 |
| 4 壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松症模型大鼠左胫骨骨组织平均骨小梁密度及病理形态学的影响 |
| 讨论 |
| 1 中医本虚标实是绝经后骨质疏松的主要发病机理 |
| 2 对实验性骨质疏松症模型的讨论 |
| 3 壮骨止痛方Ⅱ与壮骨止痛方的关系及抗骨质疏松症的比较 |
| 4 壮骨止痛方Ⅱ对骨质疏松症模型鼠血清雌激素的影响 |
| 5 壮骨止痛方Ⅱ对骨质疏松症模型鼠胫骨生物力学指标的影响 |
| 6 壮骨止痛方Ⅱ对骨质疏松症模型鼠腰椎骨密度的影响 |
| 7 壮骨止痛方Ⅱ对骨质疏松症模型鼠骨小梁密度的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的主要研究成果及论文 |
（4）成骨细胞形成及其异常调控导致绝经后骨质疏松症的分子机制（论文提纲范文）
| 英文缩略语 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 一、MSCs的培养及表面分子的鉴定 |
| 二、成骨诱导培养条件下，MSCs向成骨细胞分化的能力 |
| 三、成脂诱导条件下，MSCs向脂肪细胞分化的能力 |
| 讨论 |
| 第二部分 免疫细胞对间充质干细胞向成骨细胞分化的调节作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 一、骨髓单核细胞对MSC向成骨细胞分化的调节 |
| 二、调节性T细胞对MSC向成骨细胞分化的调节 |
| 讨论 |
| 第三部分 DHEA促进间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 一、DHEA促进MSCs向成骨细胞分化 |
| 二、DHEA调控骨代谢及脾脏免疫状态 |
| 讨论 |
| 第四部分 BSNXD促进间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 一、BSNXD促进MSCs向成骨细胞分化 |
| 二、BSNXD调控骨代谢及脾脏免疫状态 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究生期间完成的论文和综述 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（5）更年春方对破骨细胞的分化与凋亡及骨吸收活性的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 药物 |
| 1.1.3 主要试剂和仪器 |
| 1.2 含药血清的制备 |
| 1.3 破骨细胞体外分离培养 |
| 1.4 检测项目与方法 |
| 1.4.1 破骨细胞的鉴定 |
| 1.4.2 破骨细胞计数 |
| 1.4.3 骨片吸收陷窝分析 |
| 1.4.4 破骨细胞的凋亡情况检测 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 破骨细胞培养鉴定结果 |
| 2.2 破骨细胞计数 |
| 2.3 破骨细胞所致骨陷窝面积的检测 |
| 2.4 对破骨细胞凋亡率的影响 |
| 3 讨论 |
（6）中药更年春对破骨细胞的作用及对骨代谢相关基因表达的影响（论文提纲范文）
| 英文缩写 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 更年春方对破骨细胞的分化、骨吸收活性及凋亡的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 更年春方对骨髓微环境中骨代谢相关基因表达的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
（7）更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用观察及部分机理探讨（论文提纲范文）
| 英文缩写 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用观察 |
| 材料和方法 |
| 一.材料与试剂 |
| 二.方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用部分机理研究 |
| 材料和方法 |
| 一.材料与试剂 |
| 二.方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究生期间完成的论文 |
| 致谢 |
| 雌激素抗皮肤老化的作用及机制 |
（9）更年春方预防实验性原发性骨质疏松作用机理初探（论文提纲范文）
| 一、材料和方法 |
| 1.实验动物及分组 |
| 2.药物 GNC |
| 3.实验仪器和试剂 |
| 4.激素测定 |
| 5.RT-PCR 半定量分析 |
| 6.统计分析 |
| 二、结果 |
| 1.各组大鼠血清E2水平的比较 |
| 2.各组大鼠胫骨骨骺ERα、ERβ mRNA |
| 3.各组大鼠胫骨骨骺 OPG、RANKL mRNA 表达水平的比较 |
| 4.各组大鼠胫骨骨骺 |
| 5.相关回归分析 |
| 三、讨论 |
（10）加味左归饮治疗更年期综合征临床疗效与机理研究（论文提纲范文）
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 中医对更年期综合征病因病机的认识 |
| 1.1 肾气渐衰是发病基础 |
| 1.2 阴阳失调是发病机理 |
| 1.3 多脏同病是病理特点 |
| 1.4 痰浊、瘀血病理产物的产生 |
| 2 更年期综合征临床辨证分型和中医药治疗的研究概况 |
| 2.1 辨证论治 |
| 2.2 基本方加减治疗 |
| 2.3 中成药或专方治疗 |
| 2.4 中西合参，对症治疗 |
| 3 更年期综合征中西医结合微观辨证的研究概况 |
| 3.1 症状程度、精神类型与辨证分型 |
| 3.2 神经内分泌指标与辨证分型 |
| 3.3 自由基与辨证分型 |
| 3.4 微量元素 |
| 4 中药及复方治疗更年期综合征的药理作用机制研究概况 |
| 4.1 对神经-内分泌-免疫网络的影响 |
| 4.2 对心血管系统影响 |
| 4.3 调节体内自由基代谢 |
| 4.4 对骨代谢及骨质疏松症的影响 |
| 5 中药防治更年期综合征研究中存在问题和对策 |
| 5.1 加强统一客观的辨证诊断标准和疗效判定标准的规范统一 |
| 5.2 强化和提高临床科研设计水平 |
| 5.3 加强中药治疗药物的筛选、研究、开发 |
| 6 本研究的设想和意义 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1. 临床资料 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 2 研究方法与指标 |
| 2.1 加味左归饮的组成 |
| 2.2 治疗措施和疗程 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 疗效判断标准 |
| 3 统计方法 |
| 4 研究结果 |
| 4.1 症状评分变化 |
| 4.2 性激素的变化 |
| 4.3 BMD变化 |
| 4.4 临床疗效的比较 |
| 5 讨论 |
| 5.1 更年期综合征的激素替代治疗和中医治疗 |
| 5.2 加味左归饮组方依据及方药分析 |
| 5.3 观测指标的意义 |
| 5.4 加味左归饮对更年期综合征妇女各项观察指标的影响 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 加味左归饮对去卵巢大鼠血清激素的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 实验动物及造摸 |
| 1.3 剂量设置和动物分组 |
| 1.4 主要仪器和试剂 |
| 1.5 指标测定方法 |
| 2 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组动物血清性激素水平的改变 |
| 3.2 各组动物血清骨钙素(BGP)、降钙素(CT)的变化 |
| 4 小结 |
| 4.1 E_2、FSH、LH与更年期综合征 |
| 4.2 BGP、CT与骨质疏松 |
| 4.3 加味左归饮对去卵巢大鼠血清E_2、FSH、LH的影响 |
| 4.4 加味左归饮对去卵巢大鼠血清 BGP、CT水平的影响 |
| 实验二 加味左归饮对去卵巢大鼠骨密度的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 实验动物及造模 |
| 1.3 剂量设置和动物分组 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 大鼠骨密度测定方法 |
| 2 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 4.1 去卵巢大鼠与骨质疏松 |
| 4.2 加味左归饮对大鼠骨密度的影响 |
| 实验三 加味左归饮对去卵巢大鼠骨组织形态学和形态计量学的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 实验动物及造模 |
| 1.3 剂量设置和动物分组 |
| 1.4 主要试剂和仪器 |
| 1.5 大鼠骨组织形态计量学侧定方法 |
| 2 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HE染色切片、光镜观察结果(病理图片见附录1) |
| 3.2 骨组织形态计量学检测结果 |
| 4 小结 |
| 实验四 加味左归饮对去卵巢大鼠子宫重量和形态的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 实验动物及造模 |
| 1.3 剂量设置和动物分组 |
| 1.4 主要试剂和仪器 |
| 1.5 观察指标与方法 |
| 2. 统计方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 各组动物子宫重量的改变 |
| 3.2 各组动物子宫病检结果的比较 |
| 4. 小结 |
| 4.1 加味左归饮对去卵巢大鼠子宫重量的影响 |
| 4.2 加味左归饮对去卵巢大鼠子宫病理改变的影响 |
| 4.3 加味左归饮对子宫作用的机理分析 |
| 实验五 加味左归饮对去卵巢大鼠下丘脑雌激素α受体的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 实验动物及造摸 |
| 1.3 剂量设置和动物分组 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要仪器设备 |
| 1.6 ERα免疫组化反应方法 |
| 1.7 ERα原位杂交方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 下丘脑 ERα及其mRNA阳性细胞的分布 |
| 3.2 下丘脑ERα及其mRNA阳性细胞数量变化 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 讨论与结论 |
| 1 左归饮治疗更年期综合征的临床研究 |
| 1.1 加味左归饮对更年期综合征妇女症状评分的影响 |
| 1.2 加味左归饮对更年期综合征妇女血清性激素的影响 |
| 1.3 加味左归饮对更年期综合征妇女骨密度的影响 |
| 2 左归饮治疗更年期综合征的实验研究 |
| 2.1 加味左归饮对去卵巢大鼠血清激素的影响 |
| 2.2 加味左归饮对去卵巢大鼠骨密度的影响 |
| 2.3 加味左归饮对去卵巢大鼠骨组织形态学和形态计量学的影响 |
| 2.4 加味左归饮对去卵巢大鼠子宫形态的影响 |
| 2.5 加味左归饮对去卵巢大鼠下丘脑 ERα的影响 |
| 3. 加味左归饮治疗更年期综合征的机理探讨 |
| 3.1 促进和调节功能未完全衰退的卵巢分泌 E_2 |
| 3.2 通过上调下丘脑 ERα的表达而起作用 |
| 3.3 植物雌激素的作用 |
| 3.4 通过升高血清骨钙素和降钙素的水平而升高骨密度 |
| 4. 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1. 加味左归饮对去卵巢大鼠骨组织形态学的影响各组病理图片 |
| 2. 加味左归饮对去卵巢大鼠子宫形态学的影响各组病理图片 |
| 3. 加味左归饮对去卵巢大鼠下丘脑雌激素α受体的影响各组图片 |
| 致谢 |
四、“更年春”对实验性原发性骨质疏松病理形态学的初步作用（论文参考文献）
- [1]狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究[D]. 连雅君. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）[J]. 国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室. 世界科学技术-中医药现代化, 2013(05)
- [3]壮骨止痛方Ⅱ对实验性骨质疏松症的疗效及作用机理研究[D]. 张小君. 湖南中医药大学, 2013(07)
- [4]成骨细胞形成及其异常调控导致绝经后骨质疏松症的分子机制[D]. 邱学敏. 复旦大学, 2013(03)
- [5]更年春方对破骨细胞的分化与凋亡及骨吸收活性的影响[J]. 杨晓莉,王文君,李大金,金慰芳,周文江. 上海中医药杂志, 2008(05)
- [6]中药更年春对破骨细胞的作用及对骨代谢相关基因表达的影响[D]. 杨晓莉. 复旦大学, 2008(03)
- [7]更年春方对去卵巢大鼠皮肤组织的抗衰老作用观察及部分机理探讨[D]. 袁怡清. 复旦大学, 2008(03)
- [8]更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体亚型的调节[J]. 刘克菊,王文君,金慰芳,周文江,李大金. 复旦学报(医学版), 2005(04)
- [9]更年春方预防实验性原发性骨质疏松作用机理初探[J]. 刘克菊,王文君,李大金,周文江. 上海中医药杂志, 2005(06)
- [10]加味左归饮治疗更年期综合征临床疗效与机理研究[D]. 郑雨. 广州中医药大学, 2005(06)