一、TTV经胎盘的垂直传播（论文文献综述）
闫满[1]（2019）在《猪细环病毒2型与猪圆环病毒2型双重荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用》文中指出为大力推进畜牧业生产方式的转变,国家生猪规范化生产技术日渐成熟。然而,由于生猪饲养环境未能得到根本性的改善,导致猪传染性疾病对养猪业,甚至人类的健康危害日趋严重。诊断、治疗及防控的难度越来越大,对于新发现的病原以及多种病原体混合感染的诊断需求尤为迫切。仔猪断奶后多系统衰竭综合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS）,是近些年我国多地区猪场发生的一种慢性、进行性的疾病,其病因较为复杂,致死率极高,主要为猪圆环病毒感染。最近研究发现,PMWS存在猪圆环病毒（porcine circovirus,PCV）与其他病原的混合感染。自发现PMWS以来,围绕着PMWS病原的研究不断深入。PCV与PMWS高度相关,PMWS病猪的病变组织中均发现大量的PCV2抗原,借助于细胞培养技术分离出PCV2病毒,但没有分离到其它病原。而在PMWS现场的病例中发现,其临床表现特定病变与PCV2严重程度一致。PMWS病例中经常检出PCV2而较少检出其它病原的结果,表明PCV2是PMWS的主要病原,单独感染能够引起PMWS。细环病毒（Transfusion Transmitted Virus或Torque teno virus,TTV）,为指环病毒科（Anelloviridae）细项环病毒属成员（Anellovirus）,是一种无囊膜DNA病毒,基因组呈单链、闭合环状。猪细环病毒（Torque Teno Sus,TTSuVs）能够感染很多外表健康的动物。TTSuVs病毒本身的感染不会立刻引发疾病。但是TTSuVs可以影响一些疾病的发生和发展,甚至影响它们的结果。目前还没有报道TTSuVs直接与猪某些疾病的发生有关。由于PCV2可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,而PCV2的遗传关系与TTSuVs最为接近,有学者认为PMWS等由猪圆环病毒引起的相关疾病（PCVD）可能是PCV2与TTSuV协同感染引起的。为此本研究构建PCV2与TTSuV2双重荧光定量PCR检测方法,为在临床上能够同时快速、准确检测PCV2与TTSuV2提供方案,为分析PCV2与TTSuV2的协同致病性提供途径。1.PCV2型实时荧光定量PCR检测方法的建立提取病料中病毒基因组,根据GenBank公布的PCV2序列保守区设计特异性引物进行PCR扩增。将PCR产物纯化后与克隆载体连接,构建标准质粒。以标准质粒为模板,进行引物浓度、退火温度、Taq酶用量的优化,绘制实时荧光定量PCR的标准曲线,建立PCV2实时荧光定量PCR检测方法。PCV2单重荧光定量PCR最佳反应体系为:Premix Ex Taq（2×）12.5μL,引物1.0μM,探针0.75μM,DNA模板3μL,水补至20μL。优化后反应条件为:95℃,30 s;95℃,10s;56.6℃,30 s;35个循环。2.TTSuV2型实时荧光定量PCR检测方法的建立提取病料中病毒基因组,根据GenBank公布的TTSuV2序列保守区设计特异性引物进行PCR扩增。将PCR产物纯化后与克隆载体连接,构建标准质粒。以标准质粒为模板,进行引物浓度、退火温度、Taq酶用量的优化,绘制实时荧光定量PCR的标准曲线,建立TTSuV2型实时荧光定量PCR检测方法。TTSuV2单重荧光定量PCR最佳反应体系为:Premix Ex Taq（2×）12.5μL,引物1.0μM,探针1.0μM,DNA模板3μL,水补至20μL。优化后反应条件为:95℃,30 s;95℃,10 s;55.6℃,30 s;35个循环。3.PCV2型与TTSuV2型双重荧光定量PCR检测方法的初步应用通过DNASTAR软件分析,确认两个探针,四个引物相互之间不会形成引物二聚体,寻找最佳的退火温度和引物及探针浓度。结果显示,TTSuV2及PCV2双重荧光定量PCR的最佳条件如下:引物浓度分别为PCV2 1.0μM、TTSuV2 1.0μM;探针浓度分别为PCV2 1.0μM、TTSuV2 1.0μM;反应条件为95℃、30 s,95℃、10 s,55.8℃、30 s,35个循环。在此条件下双重荧光定量PCR对两种标准品的最低拷贝数均为1×102 copies/μL,不存在非特异性扩增曲线,无交叉反。应用所建立的双重荧光定量PCR检测方法,对2017-2018年8月期间,送检至吉林农业科技学院猪生态养殖及疫病防控中心的300份血清样本进行检测,结果显示PCV2单独感染率检出率为36.0%,TTSuV2单独感染检出率为60.0%,两种病毒混合感染检出率为14.8%。本研究建立的2型猪细环病毒及2猪圆环病毒双重荧光定量PCR检测方法比普通PCR方法更敏感、特异,且具有较好的临床实用性,可用于临床样品的检测。
刘建波[2]（2014）在《猪细环病毒与猪圆环病毒2型分子生物学特性研究》文中进行了进一步梳理猪细环病毒（Torque teno sus viruses, TTSuV）和猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2,PCV2）在猪群中广泛分布。近年来研究表明，TTSuVs与PCV2混合感染率较高。PCV2能够引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）等猪圆环病毒相关疾病（Porcine circovirus associated disease, PCVAD）。关于TTSuVs分子生物学研究甚少，本研究开展了TTSuVs遗传变异分析、抗原表位鉴定、感染性分子克隆构建、拯救毒株动物感染试验及病毒结构蛋白启动子等研究；此外还对PCV2衣壳蛋白（Capsid, Cap）中和抗原表位的关键氨基酸进行了解析。本研究旨在了解TTSuVs和PCV2的分子生物特性，为这两种病毒的协同感染致病性提供科学依据。TTSuVs是一种单股负链环状DNA病毒，临床流行的毒株间存在较大的基因差异，为了阐明该病毒在我国猪群中的遗传变异情况，本研究从临床送检的病料中，采用高保真PCR法扩增TTSuV1和TTSuV2基因组，将基因组克隆至pMD18-T载体中构建重组质粒，重组质粒酶切鉴定后测序。共获得8株TTSuV1和8株TTSuV2全基因组序列，长度约2.9kb；将获得的序列与GenBank下载的29株TTSuV1和40株TTSuV2基因组序列进行了对比，绘制了系统发育进化树。结果表明，TTSuV1被分为4个基因亚群；其中TTSuV1a亚群毒株间基因序列同源性为87.5～95.2%，TTSuV1b亚群毒株间基因序列同源性为83.8～99.9%，TTSuV1c亚群毒株间序列同源性为80.3～97.6%，TTSuV1d亚群仅有2个毒株序列，均来自国内。TTSuV2被分为4个基因亚型，其中TTSuV2a、TTSuV2b和TTSuV2d亚群中毒株间基因序列同源性均为86.7～99.7%，TTSuV2c亚群中仅含2个毒株序列，均来自国内。TTSuV1d、TTSuV2c和TTSuV2d这3个亚群是我国猪群中的特有毒株。本研究表明TTSuVs不同基因亚群毒株间有较高变异性。TTSuV1ORF1编码Cap蛋白，其诱导机体产生的抗体具有免疫保护作用。在遗传变异分析基础上，Liu等（2013）制备了针对TTSuV1-c亚群流行毒株的8株抗TTSuV1Cap蛋白的单克隆抗体（Monoclonal antibody, mAb）。本研究通过原核截短表达的Cap蛋白和合成肽扫描技术方法，对这些mAb对应的抗原表位进行了鉴定。结果表明，有7株单抗针对于同一个Cap抗原表位，其核心序列为536HPKYAGQGGGYTT548；另1株单抗（1E9）识别的抗原表位核心区序列为549EIGHQGITAASLR561。有趣的是，这2个抗原表位是毗邻的，但彼此独立。以含有抗原表位的C-3多肽作为包被抗原，建立了一种间接ELISA方法，用于检测临床猪血清中TTSuV1抗体。用该方法对临床送检200份猪血清样品检测结果表明，TTSuV1抗体阳性率达81.0%，表明该病毒在我国猪群中广泛流行，为进一步开展该病毒的流行病学调查提供了技术手段。为了寻找适合TTSuV1体外培养增殖的细胞系，以期获得TTSuV1纯毒株，本研究以克隆的TTSuV1-SY基因组为骨架，基因组内插入1个外源的Sal I酶切位点，经酶切再环化后借助脂质体试剂转染ST和PK-15等细胞。对拯救克隆毒株鉴定结果显示，转染后48h能够检测到病毒抗原阳性细胞，该毒株（TTSuV1-SY）第2代和第3代细胞培养物仍能检测到病毒抗原阳性细胞，表明病毒拯救获得成功。但自第4代起无阳性细胞出现，表明拯救的毒株无法适应体外培养。为了阐明拯救毒株的Cap蛋白在细胞中抗原定位，用TTSuV1-SY转染细胞培养物，经抗病毒Cap的多抗和荧光标记二抗反应孵育，用共聚焦显微镜观察到该病毒Cap蛋白主要在细胞质内合成，随后转入细胞核内定位。Western blotting分析表明，TTSuV1Cap蛋白分子量37kDa，与预测ORF1编码的蛋白差异较大，推断可能是病毒转录中存在mRNA剪辑。用拯救的TTSuV1-SY株第1代培养物接种30日龄SPF巴马猪3头，病毒接种后试验猪无明显临床症状，体温和体重与对照组无显着差异；病理学观察仅在腹股沟淋巴结有轻微的淋巴滤泡增生，肺脏有轻度间质性肺炎。PCR法检测试验猪小肠和肺脏中病毒核酸呈阳性，表明病毒在猪体内有复制。在TTSuV1ORF1前导序列区设计系列引物，PCR法扩增目的基因片段，借助pGL3-Basic载体和pRL-TK载体，用双荧光素酶报告基因检测系统验证TTSuV1ORF1前导区的启动子活性。结果表明，TTSuV1196nt～525nt序列能够启动萤火虫荧光素酶基因转录，证实这段序列内存在TTSuV1ORF1启动子。对上述序列进行截短，经精细鉴定证实该启动子核心区域为250nt～400nt。在TTSuV1基因组中缺失这段区域后影响蛋白质的表达，反向证实这段区域能够启动ORF1的转录。对TTSuV1ORF1编码区启动子的鉴定，为该病毒分子生物学研究奠定了基础。PCV2Cap蛋白是病毒主要结构蛋白，它能够诱导机体产生中和抗体，具有保护性抗原功能。先前获得的单抗8E4是针对PCV2Cap蛋白的，其具有中和病毒活性，针对的抗原表位为构象表位。Huang等（2011）研究证明，mAb8E4仅与PCV2a基因型的LG株、CL株和JF2株发生特异性反应，而不与PCV2b基因型毒株（YJ和JF）发生反应。本研究将PCV2b/JF株Cap蛋白的第59位精氨酸突变为丙氨酸后，突变毒株能够被mAb8E4识别和中和；同样将PCV2b/YJ株Cap蛋白的第59位精氨酸突变为丙氨酸，以及第60位的丙氨酸突变为苏氨酸后，突变毒株也能够被8E4mAb识别和中和。本研究证实PCV2Cap蛋白中的第59位和第60位氨基酸参与构象表位的形成；并且在PCV2b毒株（JF和YJ）中突变第59位氨基酸或第59/60位氨基酸后能够产生新的中和表位。本研究为进一步确定该中和构象表位和对PCV2不同基因型毒株抗原差异分型提供了科学依据。综上所述，我国猪群中TTSuVs毒株构成复杂，遗传变异率较高；基于TTSuV1Cap蛋白抗原表位序列合成多肽抗原，建立了一种检测该病毒抗体的间接ELISA方法；以感染性克隆技术拯救出TTSuV1-SY毒株，经PK-15和ST细胞体外传代证明该毒株体外培养适应性不强、增殖能力弱，接种试验猪无明显致病性；TTSuV1ORF1启动子的鉴定为该病毒分子生物学研究奠定了基础。此外，本研究阐明了PCV2Cap蛋白中第59位和第60位氨基酸是决定中和构象表位的关键氨基酸。
施研进[3]（2014）在《石河子及北屯地区猪TTV及PCV2的基因检测及基因型分析》文中指出猪源输血传播病毒（Torque Teno virus，TTV）在世界大部分猪场都有较高的感染率。人源TTV感染人后，会发生重型肝炎等症状；圆环病毒2型（Circovirus type2，PCV2）是影响和诱发猪死亡和发病的重要病原之一。为了解石河子及北屯地区猪源TTV及PCV2的感染情况，并进一步研究猪源TTV与圆环病毒2型间是否存在协同影响的作用，本研究对在石河子地区及北屯地区猪源样品进行了TTV和PCV2的基因检测，并对流行毒株的基因型进行了分析。研究中采用康为世纪公司的血液基因组小量提取试剂盒，对石河子屠宰场随机采集的206份猪抗凝血液、北屯地区屠宰场采集的72猪抗凝血液，及石河子周边猪场采集的不同日龄仔猪抗凝血液50份、母猪的抗凝血液10份进行DNA提取。根据相关数据合成了三对引物，建立了用于检测TTV1、TTV2及PCV2的聚合酶链反应（PolymeraseChain Reaction，PCR）检测方法，在此基础上，对反应条件进行了优化，建立了检测TTV1和PCV2的双重PCR检测方法。利用本研究建立的PCR检测方法，对采集样品进行检查，同时选取部分阳性样品，对PCR产物采用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收纯化，对纯化的PCR产物进行TA克隆，经PCR鉴定后进行序列测定。主要结果如下：1、石河子和北屯地区猪TTV1感染率为41.4%（140/338）；TTV2的感染率为21.3%（72/338）；TTV1和TTV2混合感染率为8.9%（30/338）；PCV2的感染率为4.3%（12/278）。2、在石河子地区检测的8例PCV2阳性样品中有5例为TTV1与PCV2混合感染，有1例为TTV2与PCV2混合感染，有1例为TTV1、TTV2与PCV2混合感染，一例为PCV2阳性。在石河子周边养猪场采集5份外观为PCV2发病猪，进行解剖，并进行PCR检测，发现5份病猪全部为PCV2及TTV混合感染。3、选取部分阳性样品进行序列测定，将分离株的基因序列与Genbank登录的已知猪TTV1、TTV2、PCV2序列进行比对。结果显示本研究获得的TTV1序列与已报道序列的同源性为82.34%-95.59%；TTV2序列与已报道序列的同源性为83.75%-96.17%；所获PCV2序列与PCV2a参照序列之间的同源性为86.4%-87.4%，与PCV2b参照序列之间的同源性为92.9%-96.4%，表明所获PCV2序列为2b型。4、建立了检测TTV1和PCV2的双重PCR方法。采用双重PCR方法检测检测临床样品与相应的TTV1PCR检测结果和PCV2PCR检测结果无明显差异。
刘建波,刘长明[4]（2012）在《猪输血传播病毒流行病学与遗传变异的研究进展》文中进行了进一步梳理摘要猪输血传播病毒（PTTV）是最近发现的一种新病毒,属于指环病毒科,ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的猪群中PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与猪圆环病毒2型（PCV2）起协同致病作用。由于目前该病毒体外分离尚未获得成功,对其致病性和血清学诊断方法的研究延后。本文就PTTV的发现、病原学及培养特性、流行状况、传播方式,以及诊断方法和遗传变异情况等研究进展进行简要综述,以期为今后对PTTV的研究提供依据。
万遂如[5]（2012）在《当前我国猪群中新出现的病毒感染》文中提出近年来,从我国发病猪群中检出了猪博卡病毒、猪输血传播病毒及杯状病毒和嵴病毒等,目前已成为养猪业与兽医界中的热点问题。国内学者对新出现的病毒开展研究工作才起步,是一个新问题。本文就现有文献资料,作一简介,仅供参考,敬请各位同仁们批评指教。
梅淼[6]（2012）在《四川省猪细环病毒的分子流行病学调查及其II型致断奶仔猪的病理组织学观察》文中研究指明Torque teno sus virus （TTSuV）属于新建立的指环病毒科Iotatorquevirus属成员,为一种小二十面体无囊膜单股负链环状DNA病毒,呈全球分布,在家猪和野猪群中感染率较高。本研究对采自四川省各个不同州市的244份猪血清通过套式PCR （nPCR）扩增非翻译区（UTR）部分片段,测序并进行序列分析,构建进化树。另外,通过TTSuV1（272bp）、TTSuV2（225bp）和TTSuVs基因组UTR的130bp重叠序列研究TTSuVs的分子进化。将28日龄SPF猪随机分成两组,实验组21头,对照组3头,利用不含TTSuV1和PCVs基因组而含有TTSuV26.91×107基因组拷贝/mL的肝组织匀浆液,通过肌肉注射人工攻毒实验组,对照组采用同种方式注射1mL无菌DMEM,分别于3、7、10、14、17、21和24dpi剖杀,采集心、肝、脾、肺、肾、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、胰腺、扁桃体、十二指肠用于病理组织学观察。将所有组织在10%中性甲醛溶液中固定24-48h,通过常规操作并包埋在固体石蜡中,将组织切片切成4～5μm厚,并用苏木精-曙红（HE）染色,在显微镜下观察病理组织学变化。流行病学调查显示,TTSuVs两个基因型在不同猪场均有感染。感染TTSuV1或TTSuV2的阳性率为83.20%,共感染阳性率为18.03%,TTSuV2感染阳性率（76.23%）显着高于TTSuV1（25%）.另外,测序的TTSuV基因组UTR片段足够成为TTSuV的分子标签。进化分析显示TTSuVs基因型均可分为两个亚型,且TTSuV1b亚型和TTSuV2两个亚型在四川流行。攻毒实验显示,与对照组相比,实验组均未表现出临床症状。但病理组织学观察显示,实验组心肌纤维和心内膜出血、轻度间质性肺炎、轻度膜性肾小球肾病、肝脏汇管区中度炎症细胞浸润、胰腺小体灶状出血、十二指肠粘膜下层和纵横肌外侧小管有少量红细胞、扁桃体和肺门淋巴结毛细血管有少量红细胞和炎性细胞（淋巴细胞和嗜酸性粒细胞）渗出、淋巴结副皮质区有炎性细胞渗出和淋巴细胞坏死。病理学实验表明TTSuV2能稳定地传染给阴性猪,TTSuV2能引起特征性的组织病理损伤,但在这些实质器官中并没有显着的病理组织学变化,尤其消化器官和免疫器官。TTSuV2并不是猪的常见病原,不能引起特异性的疾病。本研究为四川省的TTSuV感染情况丰富了其流行病学资料及其致病性研究的实验数据,有利于监测和研究猪TTSuV的疫源、进化、致病性特征,为进一步深入研究病毒形态结构、遗传与变异、基因功能和致病性奠定一定的试验生物学基础。
刘建波,刘长明[7]（2012）在《猪细环病毒流行病学与遗传变异研究进展》文中研究指明猪细环病毒（PTTV）是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但仍没有找到合适的细胞系适于病毒的体外培养。论文主要围绕其流行病学和遗传变异情况进行了综述,简要介绍了该病毒的多种检测方法,这对进一步研究该病毒的分布和致病性及防控有重要意义。
万遂如[8]（2012）在《当前我国猪群中新出现的病毒感染》文中指出近年来,从我国发病猪群中检出了猪博卡病毒、猪输血传播病毒及杯状病毒等,目前已成为养猪业与兽医界中的热点问题。国内学者对新出现的病毒开展研究工作才起步,是一个新问题,现在写文介绍新病毒感染,不可避免会存在说不清道
周晓光,肖昕,朱宁湖,熊爱华,陈新,肖小敏,周伯平,徐六妹[9]（2007）在《输血传播病毒母婴垂直传播的途径与机制研究》文中研究表明目的探讨输血传播病毒（transfusion transmitted virus,TTV）母婴垂直传播的途径和可能机制。方法采用地高辛标记探针,对36例产妇胎盘组织TTV DNA进行原位杂交定位检测。根据孕妇静脉血和胎儿脐血TTV DNA检测结果,将其胎盘组织标本分为以下三组:A组为两者均阳性12例;B组为孕妇阳性、胎儿阴性12例;C组为两者均阴性12例。结果TTV DNA阳性杂交信号呈蓝紫色团块状或颗粒状,位于感染细胞的细胞核内,偶见于细胞浆内。在36份胎盘组织标本中共有13份TTV DNA呈阳性,阳性率为36.1%。其中A组TTV DNA阳性8例（8/12）,B组TTV DNA阳性5例（5/12）,C组未检出TTV DNA。结论TTV可通过胎盘组织垂直传播进入胎儿血液,其传播机制属细胞源性母婴垂直传播。
赵景颇,赵艳阳,韩硕,姚利,胡文玉[10]（2006）在《输血传播病毒在母婴间传播的方式及传播率》文中进行了进一步梳理
二、TTV经胎盘的垂直传播（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、TTV经胎盘的垂直传播（论文提纲范文）
（1）猪细环病毒2型与猪圆环病毒2型双重荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 猪圆环病毒的研究进展 |
| 1.1 PCV2 编码的相关蛋白 |
| 1.2 PCV2 与细胞蛋白质的相互作用 |
| 1.3 PCV2 与细胞信号转导的相互作用 |
| 1.4 PCV2 与细胞氧化应激 |
| 1.5 PCV2 诱导的细胞凋亡 |
| 1.6 PCV2 诱导的细胞自噬 |
| 1.7 PCV2 与宿主免疫系统的相互作用 |
| 第二章 猪细环病毒的研究进展 |
| 2.1 猪细环病毒的形态结构和理化特性 |
| 2.2 TTSuV的遗传变异性 |
| 2.3 猪TTSuV病毒的感染 |
| 第三章 猪圆环病毒与猪细环病毒的诊断 |
| 3.1 PCV2 的诊断 |
| 3.2 TTSuV病毒的检测 |
| 第二篇 研究内容 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（2）猪细环病毒与猪圆环病毒2型分子生物学特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 猪细环病毒 |
| 1.1.1 病原学 |
| 1.1.2 流行病学 |
| 1.1.3 病毒培养 |
| 1.1.4 感染性分子克隆 |
| 1.1.5 TTSuVs 分子生物学 |
| 1.1.6 TTSuVs 的遗传变异 |
| 1.1.7 TTSuV 病原学诊断方法 |
| 1.1.8 血清学诊断方法 |
| 1.2 猪圆环病毒 2 型 |
| 1.2.1 概况 |
| 1.2.2 病原学 |
| 1.2.3 分子生物学 |
| 1.2.4 流行病学 |
| 1.2.5 PCV2 相关疾病及流行趋势 |
| 1.2.6 PCV2 感染和复制机制 |
| 1.2.7 PCV2 疫苗 |
| 1.3 研究的目的和意义 |
| 第二章 我国猪群中 TTSuVs 分子遗传变异分析 |
| 摘要 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料方法 |
| 2.2.1 PCR 法扩增 TTSuV1 和 TTSuV2 基因组 |
| 2.2.2 病毒基因组的克隆 |
| 2.2.3 序列分析及进化树构建 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 从 TTSuVs 阳性病料中扩增基因组 |
| 2.3.2 基因组测序 |
| 2.3.3 构建系统发育进化树 |
| 2.3.4 TTSuV1 和 TTSuV2 的同源性分析 |
| 2.3.5 TTSuV1 和 TTSuV2 基因组中的缺失和插入分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 TTSuV1 Cap 蛋白抗原表位鉴定及其应用 |
| 摘要 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料方法 |
| 3.2.1 细胞、质粒和抗体 |
| 3.2.2 制备鼠源多克隆抗体 |
| 3.2.3 引物设计，PCR 扩增以及重组表达质粒构建 |
| 3.2.4 截短 ORF1 表达产物的表达与鉴定 |
| 3.2.5 TTSuV1 Cap 抗原表位鉴定 |
| 3.2.6 TTSuV1 表位的特异性比对 |
| 3.2.7 间接 ELISA 方法的建立 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 扩增 ORF1 截短表达基因并鉴定重组表达质粒 |
| 3.3.2 单抗表位与其他 TTSuV1 株的比对分析 |
| 3.3.3 其它毒株抗原表位区域与单抗的免疫反应性鉴定 |
| 3.3.4 猪 TTSuV1 血清抗体的检测 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 TTSuV1 感染性克隆构建及病毒拯救 |
| 摘要 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 TTSuV1 基因组扩增 |
| 4.2.3 毒株拯救及其细胞传代 |
| 4.2.4 Western blotting 分析 |
| 4.2.5 病毒细胞定位 |
| 4.2.6 巴马猪感染试验 |
| 4.2.7 病毒体内核酸载量测定 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.0 病毒感染性克隆的构建 |
| 4.3.1 拯救毒株的鉴定 |
| 4.3.2 病毒抗原分析 |
| 4.3.3 病毒蛋白的细胞定位 |
| 4.3.4 动物感染试验 |
| 4.3.5 病毒血症检测和抗体检测 |
| 4.3.6 病毒核酸检测 |
| 4.3.7 TTSuV1 序列验证 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 TTSuV1 ORF1 启动子的研究 |
| 摘要 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 细胞、质粒和 TTSuV1 基因组 |
| 5.2.2 TTSuV1 基因组分析 |
| 5.2.3 质粒构建 |
| 5.2.4 转染和萤光值检测 |
| 5.2.5 缺失 TTSuV1 基因组中的启动子 |
| 5.2.6 启动子缺失后 TTSuV1 Cap 蛋白在 ST 细胞中的表达 |
| 5.2.7 IPMA |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 目的基因扩增和重组质粒构建 |
| 5.3.2 双荧光素酶报告系统检测 TTSuV1 启动子 |
| 5.3.3 TTSuV1 启动子的功能验证 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 PCV2 毒株构象中和表位的鉴定 |
| 摘要 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料方法 |
| 6.2.1 细胞、病毒和抗体 |
| 6.2.2 对不同 PCV2 ORF2 编码氨基酸序列分析 |
| 6.2.3 构建 PCV2-YJ/CL 和 PCV2-JF/CL 的嵌合毒和突变毒 |
| 6.2.4 体外转染实验 |
| 6.2.5 IPMA |
| 6.2.6 病毒的繁殖动力学 |
| 6.2.7 血清中和试验 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 不同 PCV2 毒株 ORF2 编码氨基酸序列对比 |
| 6.3.2 突变毒株与 PCV2 阳性血清和 8E4 单抗的反应性检测 |
| 6.3.3 重组病毒的生长动力学 |
| 6.3.4 单抗与拯救病毒的中和试验 |
| 6.4 讨论 |
| 第七章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）石河子及北屯地区猪TTV及PCV2的基因检测及基因型分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英语字母缩写和中英文全称对照表 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 TTV 研究进展 |
| 1.1 TTV 的分类及病原特点 |
| 1.1.2 TTV 的病原特点 |
| 1.2 TTV 的检测方法 |
| 1.2.1 TTV 的 PCR 检测 |
| 1.2.2 TTV 的基因分型 |
| 1.2.3 TTV 的原位杂交检测法 |
| 1.3 TTV 致病性 |
| 1.4 TTV 传播途径 |
| 1.5 TTV 流行情况研究 |
| 1.6 TTV 病毒的治疗 |
| 2 猪圆环病毒 2 型 |
| 2.1 猪圆环病毒 2 型分类及病原特点 |
| 2.1.1 猪圆环病毒 2 型分类 |
| 2.1.2 猪圆环病毒 2 型病原特点 |
| 2.2 PCV2 检测技术 |
| 2.2.1 PCV2 的 PCR 检测 |
| 2.2.2 PCV2 的原位杂交技术 |
| 2.2.3 PCV2 的 ELISA 检测 |
| 2.3 PCV2 的致病性 |
| 2.4 猪圆环病毒病的临床表现 |
| 2.5 PCV2 传播途径 |
| 2.6 PCV2 流行情况 |
| 2.7 PCV2 防治方法 |
| 3 TTV 与 PCV2 混合感染研究 |
| 第一章 石河子及北屯地区 TTV 的 PCR 检测及不同日龄 TTV 的感染情况对比 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 血液样品 |
| 1.1.2 主要仪器设备 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 主要方法 |
| 1.2.1 引物设计 |
| 1.2.2 总 DNA 提取 |
| 1.2.3 PCR 扩增 |
| 1.2.4 PCR 产物鉴定 |
| 1.2.5 回收纯化 DNA 片段 |
| 1.2.6 连接反应 |
| 1.2.7 感受态细胞制备 |
| 1.2.8 连接产物的转化 |
| 1.2.9 序列测定分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR 检测结果 |
| 2.2 阳性克隆 PCR 检测结果 |
| 2.3 序列分析结果 |
| 2.4 不同日龄仔猪及母猪感染率调查 |
| 3 分析与讨论 |
| 第二章 石河子及北屯地区 PCV2 型 PCR 检测及基因型分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 样品采集 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 主要方法 |
| 1.2.1 引物设计 |
| 1.2.2 总 DNA 提取 |
| 1.2.3 PCR 扩增 |
| 1.2.4 PCR 产物鉴定 |
| 1.2.5 回收纯化 DNA 片段 |
| 1.2.6 连接反应 |
| 1.2.7 连接产物的转化 |
| 1.2.9 序列测定 |
| 1.2.10 临床剖检 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR 检测结果 |
| 2.2 测序结果 |
| 2.3 同源性分析结果 |
| 2.4 进化树分析结果 |
| 2.5 临床剖检猪场中发现的突然死亡的仔猪 |
| 3 讨论与结论 |
| 第三章 TTV1 与 PCV2 双重 PCR 检测方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 血液样品 |
| 1.1.2 实验室使用器材 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 主要方法 |
| 1.2.1 引物设计 |
| 1.2.2 总 DNA 提取 |
| 1.2.3 PCR 扩增 |
| 1.2.4 双重 PCR 检测方法的建立 |
| 1.2.5 PCR 产物鉴定 |
| 1.2.6 回收纯化 DNA 片段 |
| 1.2.7 感受态细胞制备 |
| 1.2.8 连接反应 |
| 1.2.9 连接产物的转化 |
| 1.2.10 序列测定 |
| 1.2.11 敏感性试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR 检测结果 |
| 2.1.2 双重 PCR 反应条件的优化结果 |
| 2.1.3 双重 PCR 的灵敏度试验 |
| 2.1.4 双重 PCR 的重复性试验 |
| 2.1.5 临床应用 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）四川省猪细环病毒的分子流行病学调查及其II型致断奶仔猪的病理组织学观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 TORQUE TENO SUS VIRUS(TTSUV)的研究进展 |
| 1 TTV和TTSuV的发现 |
| 2 TTV和TTSuV的分类 |
| 3 TTV和TTSuV的病原学特征 |
| 3.1 理化性质 |
| 3.2 基因组特征及编码蛋白功能 |
| 4 TTSuV的遗传变异 |
| 5 流行病学 |
| 6 疾病相关性 |
| 7 TTSuV实验室诊断方法 |
| 7.1 TTSuV分子生物学的检测方法 |
| 7.2 TTSuV分型的检测 |
| 7.3 TTSuV的血清学诊断法 |
| 7.4 病理组织学诊断 |
| 7.5 动物模型的建立 |
| 8 本研究的目的和意义 |
| 第二章 四川省TTSUVS的分子流行病学调查 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株和载体 |
| 1.2 病料来源 |
| 1.3 主要试剂及溶液配制 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 溶液的配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 病毒总DNA的抽提 |
| 1.6 PCR物设计和合成 |
| 1.7 PCR扩增 |
| 1.8 PCR扩增产物的回收纯化 |
| 1.9 TTSuV1和TTSuV2部分UTR的克隆 |
| 1.9.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 |
| 1.9.2 PCR产物的连接 |
| 1.9.3 重组质粒的转化 |
| 1.10 重组质粒的鉴定 |
| 1.10.1 重组质粒的筛选 |
| 1.10.2 重组质粒的PCR鉴定 |
| 1.10.3 目的基因的序列测定分析和序列提交 |
| 1.11 TTSuV部分UTR序列在分子系统学中应用的可能性评价 |
| 1.12 系统发生数的构建 |
| 2 结果 |
| 2.1 部分猪场样品TTSuVs的PCR检测结果 |
| 2.2 TTSuV UTR作为分子标记的评价 |
| 2.3 基于TTSuV部分UTR的序列比对和系统进化分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 引物选择 |
| 3.2 流行病学 |
| 3.3 基因分型 |
| 3.4 分子标记UTR |
| 4 小结 |
| 第三章 TTSUV2型的病理组织学观察 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 毒株和细胞 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 单一TTSuV2病毒感染因子的获得 |
| 1.5.1 对囊膜病毒的处理 |
| 1.5.2 感染性有囊膜病毒的细胞分离鉴定 |
| 1.5.3 常见猪病毒核酸的PCR检测 |
| 1.6 TTSuV2病毒DNA载量的测定 |
| 1.7 实验设计 |
| 2 结果 |
| 2.1 病毒载量的测定 |
| 2.2 病理组织学观察 |
| 3 讨论 |
| 3.1 TTSuV2单一感染因子的获得和TTSuV2阴性猪的筛选 |
| 3.2 TTSuV2感染引起的病理损伤 |
| 3.3 TTSuV在其他相关疾病中的作用 |
| 4 小结 |
| 第四章 结论与创新点 |
| 1 结论 |
| 1.1 流行病学调查 |
| 1.2 病理组织学观察 |
| 2 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（8）当前我国猪群中新出现的病毒感染（论文提纲范文）
| 一、病毒感染情况简介 |
| (一) 猪博卡病毒感染 (PBOV) |
| 1. 病原体。 |
| 2. 流行特点。 |
| 3. 病症。 |
| 4. 诊断。 |
| 5. 公共卫生。 |
| (二) 猪杯状病毒感染 |
| 1. 病原体。 |
| 2. 流行与症状。 |
| 3. 公共卫生。 |
| (三) 猪输血传播病毒感染 (PTTV) |
| 1. 病原体。 |
| 2. 流行特点。 |
| 3. 病症。 |
| 4. 诊断。 |
| 5. 公共卫生。 |
| (四) 嵴病毒感染 |
| 1. 病原体。 |
| 2. 流行特点与病症。 |
| 3. 公共卫生。 |
| 二、防控问题 |
| 1.充分认识新病毒的危害性, 加强对其的综合防控。 |
| 2.认真总结以往的防控经验, 用以防控新出现的病毒感染。 |
| 3.药物防控。 |
四、TTV经胎盘的垂直传播（论文参考文献）
- [1]猪细环病毒2型与猪圆环病毒2型双重荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[D]. 闫满. 吉林农业大学, 2019(03)
- [2]猪细环病毒与猪圆环病毒2型分子生物学特性研究[D]. 刘建波. 中国农业科学院, 2014(10)
- [3]石河子及北屯地区猪TTV及PCV2的基因检测及基因型分析[D]. 施研进. 石河子大学, 2014(03)
- [4]猪输血传播病毒流行病学与遗传变异的研究进展[A]. 刘建波,刘长明. 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会论文集, 2012
- [5]当前我国猪群中新出现的病毒感染[A]. 万遂如. 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会论文集, 2012
- [6]四川省猪细环病毒的分子流行病学调查及其II型致断奶仔猪的病理组织学观察[D]. 梅淼. 四川农业大学, 2012(06)
- [7]猪细环病毒流行病学与遗传变异研究进展[J]. 刘建波,刘长明. 动物医学进展, 2012(03)
- [8]当前我国猪群中新出现的病毒感染[J]. 万遂如. 兽医导刊, 2012(02)
- [9]输血传播病毒母婴垂直传播的途径与机制研究[J]. 周晓光,肖昕,朱宁湖,熊爱华,陈新,肖小敏,周伯平,徐六妹. 中华围产医学杂志, 2007(02)
- [10]输血传播病毒在母婴间传播的方式及传播率[J]. 赵景颇,赵艳阳,韩硕,姚利,胡文玉. 临床荟萃, 2006(16)